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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 平末端连接，连上了，很多转化子中没有一个正确的，怎么办？
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syn1985

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zld629 at 2012-06-26 08:09:37
我的筛选办法是：载体上选个正向引物，片段上选个反向引物，做PCR。你说的加A后再连，加A加在3‘端，就不是平末端了，能连上吗？浓度要达到多少呢？我们实验室的经验是载体浓度少一点好，多的反而长不出来。...

你具体用的是什么载体 目的是啥 可否说的明白点
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11楼2012-06-26 10:39:27
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zld629

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by chan_6217911 at 2012-06-26 10:04:42
载体用pMEI处理后有没有进行去磷酸化处理，单酶切容易造成载体自连

去磷酸化的做过，长不出来。不去磷酸化再加点pmei的也做过，这回只长几个菌，然而也不是。
感谢各位的热心帮助！我再试试吧。谢谢！
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12楼2012-06-26 15:39:53
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ytetyio09

新虫 (正式写手)
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
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13楼2014-03-25 10:02:07
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ytetyio09

新虫 (正式写手)
14楼2014-03-25 16:07:41
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