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zld629木虫 (小有名气)
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[求助]
平末端连接，连上了，很多转化子中没有一个正确的，怎么办？
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| 在构建一个载体到了最后一步平末端连接，总是不成功。转化后长了不少菌，挑了100多那个，几乎整板都挑了，没有一个对的。怎么办？我用载体上片段做正引物、插入片段末端做反引物，做PCR，连接液有很亮的带，应该是有连上的了，为什么转化子中却没有？如何解决这个问题呢？ |
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13楼2014-03-25 10:02:07
zld629
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6729.5
- 帖子: 268
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- 虫号: 271867
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 医学超声与声学造影剂
2楼2012-06-24 19:40:10
3楼2012-06-25 00:25:52
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-25 13:44:56
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| 先加A连接到t载体上，鉴定后酶切，再连接到目的载体上。实在不行试试In-Fusion克隆技术。http://wenku.baidu.com/view/5bb2f4a70029bd64783e2c60.html?st=1 |
4楼2012-06-25 11:25:27