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浅浅20110418金虫 (小有名气)
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[求助]
【求助】酶切分型结果不稳定
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各位高手： 求助一下关于酶切分型的问题，最近在做酶切分型实验，预实验比较顺利，直接出了结果，但是后来重复时总是时而成功，时而失败，很不稳定，具体会出现如下一些情况： 1、酶切55度，过夜，有时会有较多的水分蒸发到壁上（离心下来还是原来的体系），这样基本就会失败了，但一样的温度也不是每次都会蒸发特别多，较少时结果还是可以的。有没有什么办法能够蒸发较少？有人说要放在一个相对密闭的环境，例如水浴时在上边加一个塑料盖子漂在水上，这样有道理吗？还是只是一种偶然的成功？ 2、酶切分型的两条带相差70bp,跑电泳时300伏需要跑15到20分钟，但是要是做一块大胶，一次跑96个样本的那种（因为我要分型的样本特别多）越往下边会跑的越慢，就需要时间更长，但这样的话一些淡的条带就会看不见了，有没有什么办法能解决？（我现在用的是2.0的胶，要区分的是350和420的片段） 3、附件的这个图出现了两回，不知道什么原因，就是没切开，且是向上凸的弧形，用的是500的marker，marker是正常的，所以可能还是酶切的问题，条带的位置是差不多对的，看到这个图我就没有接着再跑电泳了，所以marker没分很开。请问一下这个图出现的原因是什么，怎么避免？  |
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