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多糖脱色检测波长的选择
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各位大侠，小虫最近在用大孔树脂进行多糖的脱色，多糖提取液呈棕褐色、较深，我在选择色素测定波长时遇到了问题，求指导： 1. 很多虫友提到色素的吸收峰都在可见光区，而我的多糖水溶液进行全波长扫描时只有一个吸收峰，在200nm左右，后来增加溶液浓度，在190-400nm范围内扫面，出现两个峰，200nm左右一个，256nm左右一个（蛋白峰），为什么会出现这种情况，按理说溶液有颜色，在可见光区会有吸收峰啊。 2. 我用了五种大孔树脂进行脱色，发现有两种树脂可以明显使多糖溶液颜色变浅，在196nm测定的吸光值也相应的变小了，进行扫描时发现不同树脂处理液在200nm都有稳定的吸收峰，只是吸光值变小了，和脱色后溶液的颜色表现出明显的对应关系。 有些人对我选择的测定波长有异议，觉得190nm不能作为色素的特征吸收峰，拜托各位虫友发表高见，求说法！    |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
wbhh19880318: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！ 2012-06-21 10:56:50
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wbhh19880318: 金币+1, ★有帮助, 谢谢！ 2012-06-21 10:56:50
| 多糖提取液呈棕褐色、较深，我个人认为是存在问题的，色素首先需要考虑其种类，然后验证（可用分光光度法），就你谈到的问题，我很怀疑此为色素所致？棕褐色物质不一定就是色素导致的，还需要再仔细分析与实践一番，再做定断。祝好运！！！ |
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2楼2012-06-18 23:34:33
送鲜花一朵 |
谢谢您的回答，我是热水提后醇沉的，发现得到的物质颜色较深，后来做了个预实验，多次用水溶解醇沉发现颜色接近黄色，吸光值也变小了。根据文献报道，色素分为三种：水溶性，脂溶性和有色酚类、黄酮类色素，可以推断我这里面前两者肯定占多数，因此我采用了各种脱色方法进行脱色比较，蒽酮硫酸法法测多糖含量（多糖标志性反应颜色为绿色），测得脱色率和蛋白拖出率，发现所有数据都很正常，各脱色剂脱色后的颜色也和各自的190nm吸光度相一致，有一种阴离子树脂D301R可以将色素颜色脱至浅黄色，测定其脱色前后190nm吸光值计算发现脱色率高达75%，采用190nm作为色素检测波长在整个实验过程中并没有发现半点异常，求解答，谢谢老师，提前祝福端午节愉快，谢谢！ |
3楼2012-06-21 10:56:02
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hsd3521: 金币+2, 感谢专家应助，谢谢 2012-06-21 20:05:06
wbhh19880318: 回帖置顶 2012-06-24 11:08:24
hsd3521: 金币+2, 感谢专家应助，谢谢 2012-06-21 20:05:06
wbhh19880318: 回帖置顶 2012-06-24 11:08:24
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实践是检验真理的唯一标准，190nm作为色素检测波长在整个实验过程中并没有发现半点异常，测定其脱色前后190nm吸光值计算发现脱色率高达75%是否真实的反映了你提到的研究目的，我还不能确定，但是我个人认为多糖提取液色泽较深是有原因的，1.多糖中含有的部分黄酮类色素或多分色素发生氧化褐变反应。2.多糖中含糖残基（糖羟基）一定温度下易于与蛋白质氨基发生美拉德反应。3.提取高温下部分含糖残基、多酚类物质聚合反应生成大分子复合物色泽变深。怎样判断这种反应或变化，需要对实验进行仔细设计与讨论，也许你已经发现了检测这类反应的巧妙方法，当然也许是失败的。祝你好运！！！  |
4楼2012-06-21 12:53:42
rtycool
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