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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 求助关于HPLC出分叉峰的解决办法，急！
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yanling3083

金虫 (小有名气)

[求助] 求助关于HPLC出分叉峰的解决办法，急！

色谱柱为岛津VP-ODS C18柱，购买后大约使用4个月，从未用于生物样品及中药品种的分析，每次使用时均连有保护柱。
前一天使用时一切正常，第二天使用时进样后所有样品峰都出现分叉现象，具体表现为在样品峰快出完时又出一馒头峰。换用机器、保护柱、流动相、样品均无法解决，但柱压和以前一样，正常无波动。
PS：前一个人使用的流动相里有十二烷基硫酸钠，用完用10%乙腈水冲洗了20分钟，我接着她的机子使用，会不会色谱柱里进了十二烷基硫酸钠？
请有经验人士帮忙分析一下，非常感谢
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1楼 2012-06-17 11:35:24
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanling3083: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-06-19 15:33:47
估计是色谱柱出现问题了
另外你先做几个阴性对照
如果没有问题
你按照protocol做一下柱效测试 看看柱子是不是效率还在
另外，有SDS存在的话 确实有可能会有影响 你用乙腈水使劲冲洗个1~2小时，甚至更长时间试试
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9楼2012-06-18 08:55:40
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-06-17 15:54:33
yanling3083: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-06-17 16:47:37
你说的情况有可能是十二烷基硫酸钠进入了柱子里，还有可能是色谱柱本身的填料发生了塌陷，不知道你使用前是否摔过色谱柱？
建议你使用进空白样品的方法试一下，看看色谱图上是否还会出现馒头峰，如果进空白样品时，没有馒头峰出现，则基本可以说明是色谱柱塌陷。那么换一根色谱柱就行了。
如果是柱子进了十二烷基硫酸钠，可以以10%乙腈水多冲洗一段时间，再改成梯度冲洗，把柱子重新洗干净。
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2楼2012-06-17 15:04:51
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yanling3083

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nrzhw at 2012-06-17 15:04:51
你说的情况有可能是十二烷基硫酸钠进入了柱子里，还有可能是色谱柱本身的填料发生了塌陷，不知道你使用前是否摔过色谱柱？
建议你使用进空白样品的方法试一下，看看色谱图上是否还会出现馒头峰，如果进空白样品时， ...

但如果是色谱柱坍塌的话柱压应该有变化吧，我的柱压没有改变而且一直都很稳定。
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3楼2012-06-17 16:48:44
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yanling3083 at 2012-06-17 16:48:44
但如果是色谱柱坍塌的话柱压应该有变化吧，我的柱压没有改变而且一直都很稳定。...

这个不太好说，仅靠柱压不好判断。
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4楼2012-06-17 18:35:34
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