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yanling3083

金虫 (小有名气)

[求助] 求助关于HPLC出分叉峰的解决办法,急!

色谱柱为岛津VP-ODS C18柱,购买后大约使用4个月,从未用于生物样品及中药品种的分析,每次使用时均连有保护柱。
前一天使用时一切正常,第二天使用时进样后所有样品峰都出现分叉现象,具体表现为在样品峰快出完时又出一馒头峰。换用机器、保护柱、流动相、样品均无法解决,但柱压和以前一样,正常无波动。
PS:前一个人使用的流动相里有十二烷基硫酸钠,用完用10%乙腈水冲洗了20分钟,我接着她的机子使用,会不会色谱柱里进了十二烷基硫酸钠?
请有经验人士帮忙分析一下,非常感谢
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-06-17 15:54:33
yanling3083: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-06-17 16:47:37
你说的情况有可能是十二烷基硫酸钠进入了柱子里,还有可能是色谱柱本身的填料发生了塌陷,不知道你使用前是否摔过色谱柱?
建议你使用进空白样品的方法试一下,看看色谱图上是否还会出现馒头峰,如果进空白样品时,没有馒头峰出现,则基本可以说明是色谱柱塌陷。那么换一根色谱柱就行了。
如果是柱子进了十二烷基硫酸钠,可以以10%乙腈水多冲洗一段时间,再改成梯度冲洗,把柱子重新洗干净。
2楼2012-06-17 15:04:51
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yanling3083

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by nrzhw at 2012-06-17 15:04:51
你说的情况有可能是十二烷基硫酸钠进入了柱子里,还有可能是色谱柱本身的填料发生了塌陷,不知道你使用前是否摔过色谱柱?
建议你使用进空白样品的方法试一下,看看色谱图上是否还会出现馒头峰,如果进空白样品时, ...

但如果是色谱柱坍塌的话柱压应该有变化吧,我的柱压没有改变而且一直都很稳定。
3楼2012-06-17 16:48:44
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yanling3083 at 2012-06-17 16:48:44
但如果是色谱柱坍塌的话柱压应该有变化吧,我的柱压没有改变而且一直都很稳定。...

这个不太好说,仅靠柱压不好判断。
4楼2012-06-17 18:35:34
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yanling3083

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by nrzhw at 2012-06-17 18:35:34
这个不太好说,仅靠柱压不好判断。...

那我想请问一下怎么确定是不是柱子坍塌了呢?谢谢
5楼2012-06-17 19:08:09
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xiaoxiazizx

木虫 (正式写手)

应该就是色谱柱塌陷的
刻意去找的东西,往往是找不到的。天下万物的来和去,都有他的时间。
6楼2012-06-17 21:35:14
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yanling3083 at 2012-06-17 19:08:09
那我想请问一下怎么确定是不是柱子坍塌了呢?谢谢...

你可以试着进少量的十二烷基硫酸钠,看看还有没有馒头峰,如果没有,就是柱子里残留了十二烷基硫酸钠;如果还是有色谱峰分裂,那就应该是塌陷了
7楼2012-06-17 21:57:16
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by nrzhw at 2012-06-17 18:35:34
这个不太好说,仅靠柱压不好判断。...

或者进一次混合标准品溶液,看看是否每个色谱峰都出现裂分,全部裂分的话,就是塌陷。
8楼2012-06-17 22:01:52
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yanling3083: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-06-19 15:33:47
估计是色谱柱出现问题了
另外你先做几个阴性对照
如果没有问题
你按照protocol做一下柱效测试 看看柱子是不是效率还在
另外,有SDS存在的话 确实有可能会有影响 你用乙腈水使劲冲洗个1~2小时,甚至更长时间试试
9楼2012-06-18 08:55:40
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sapphira

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


yanling3083: 金币+1 2012-06-21 11:41:57
预柱与色谱柱中的联接可能有问题。一定要连接紧密。
10楼2012-06-20 12:22:37
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