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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 大家看看我做的MTT
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Kahn

金虫 (小有名气)

[求助] 大家看看我做的MTT

最近做黄酮MTT，大家帮我看一下这是染菌了吗？下图是黄酮作用肿瘤细胞两天之后，加MTT后4小时的照片。四周用培养液天填充（之前用pbs），每组五个复孔。
空白   样1
样2       样3
样4       样5
样6       样7
样8       样9
样10     未加药
黄酮浓度80umol/L，是和药物反应了还是染菌了？其他人做MTT时遇到过这种情况吗？

MTT
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1楼 2012-06-14 19:50:19
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wangzunchen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:46
这个不好说额，没有空白对照吗
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2楼2012-06-14 20:25:58
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Kahn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangzunchen at 2012-06-14 20:25:58
这个不好说额，没有空白对照吗

前五个孔是空白对照
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3楼2012-06-15 00:06:16
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wangzunchen

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:52
Kahn: 金币+3, ★有帮助 2012-06-16 09:24:54
感觉不像染菌，染菌随机性很大的，你的梯度还行啊
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4楼2012-06-15 18:44:55
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biology-jlu

木虫之王 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-06-15 23:22:57
Kahn: 金币+3, ★有帮助 2012-06-16 09:25:12
没法对应药物浓度跟孔啊！所以不好判断什么。加MTT时要用无血清培养基。
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大家好！我的研究方向为靶向纳米给药系统，欢迎研究方向相似的同仁们加我为好友，大家共同讨论，共同进步！
5楼2012-06-15 19:06:46
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magnolia414

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2012-06-18 01:04:27
Kahn: 金币+4, ★★★很有帮助, 黄酮这样的浓度，真实抑制率能多大？ 2012-06-18 03:37:31
control的OD值好低啊，应该在0.7-1.2数据才能用。如果是黄酮单体的话80umol浓度很高了，应该做样品的空白对照，即只加样品不加细胞。因为黄酮自身有吸收，会影响OD值测定的。
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6楼2012-06-17 20:59:42
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nmhsd

木虫 (正式写手)
周围的一圈是什么？DMSO吗，怎么是红色的？
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7楼2012-06-19 00:02:10
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Kahn

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by nmhsd at 2012-06-19 00:02:10
周围的一圈是什么？DMSO吗，怎么是红色的？

怕是PBS污染，所以加的培养液，前五个孔加的MTT
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8楼2012-06-19 02:53:54
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magnolia414

木虫 (著名写手)
很难说80umol这个浓度黄酮的抑制率有多大，因为一般的黄酮类化合物都没什么细胞毒活性。在高浓度的情况下，黄酮可能会析出，这样导致细胞死亡的就是物理因素而不是生物学因素。通常单体化合物IC50小于10uM才有意义，到百uM级别就没有进一步研究的价值。另外，建议你扣板后直接加MTT，这样可以避免某些细胞因贴壁不牢在用PBS冲洗时流失而造成假阳性结果。
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Kahn
9楼2012-06-19 07:40:14
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Kahn

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by magnolia414 at 2012-06-19 07:40:14
很难说80umol这个浓度黄酮的抑制率有多大，因为一般的黄酮类化合物都没什么细胞毒活性。在高浓度的情况下，黄酮可能会析出，这样导致细胞死亡的就是物理因素而不是生物学因素。通常单体化合物IC50小于10uM才有意义， ...

多谢指教
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10楼2012-06-19 11:50:29
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