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luoziwei

新虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖克隆实验 Soft Agar Colony Formation Assay 已有1人参与

请教,Soft Agar Colony Formation Assay培养15天后,肉眼可见克隆团,但不知道怎么拍照才算合格,问一下有没有人做过?求交流
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艾叶米虫

铜虫 (小有名气)

你好,我想做软琼脂糖克隆实验,结肠癌细胞株HT29. 我的步骤是这样的:1:二次水配制 1.2%及 0.6% 低熔点琼脂糖。
2:2X McCoy’s 5A 培养基,加入 20% FBS 及 2X 双抗。 与 1.2% 低熔点琼脂糖 1:1 混合,加入 1.4ml 于6孔板中,室温放至凝固。
3:消化HT29细胞,计数为 10^4/ml 。2X培养基:0.6% 低熔点琼脂糖=1:1, 取混合液 1 ml 与 100ul 细胞悬液混匀,加入上层。
4:37度,5% CO2 培养。
结果:a:上层琼脂糖不凝固。
b:细胞不贴壁
c:细胞在第三天全死了
疑问:1:上层为什么不凝固呢?
2:加入细胞时是先加入上层低熔点琼脂糖再加细胞,还是细胞和上层低熔点琼脂糖混匀后再加入上册呢?
3:步骤我的有哪里不对?求解!求指导!求指示!
转眼研三可是我这样的实验都无从下手,求指导!万谢!!
2楼2014-08-13 20:23:22
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luoziwei

新虫 (正式写手)

内容已删除
3楼2014-08-14 08:25:35
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艾叶米虫

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by luoziwei at 2014-08-14 08:25:35
毕业了哈,记不得那么清楚了。我就是把细胞跟琼脂糖混合,放4度冰箱20多分钟,然后就形成块了,然后就放培养箱,细胞可以活2个星期没问题...

谢谢你了。谢谢你。
同学,你可以把你的毕业论文发一份电子版的给我不?我想参照一下,可以么?我也快要毕业了,可是我一点思绪也没有,要补很多实验。谢谢你了。
4楼2014-08-14 09:00:07
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luoziwei

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 艾叶米虫 at 2014-08-14 09:00:07
谢谢你了。谢谢你。
同学,你可以把你的毕业论文发一份电子版的给我不?我想参照一下,可以么?我也快要毕业了,可是我一点思绪也没有,要补很多实验。谢谢你了。...

i am so sorry, 我毕业了的论文没有这部分实验,很简单的,多做几次就能找到诀窍了
5楼2014-08-15 08:23:17
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luoziwei

新虫 (正式写手)

我觉得比单细胞克隆好操作啊
6楼2014-08-15 08:23:43
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341176

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

请问同学你最后解决拍照问题了吗? 我用手机拍照的,感觉还行,不是很清晰,你有什么好的方法吗
7楼2019-05-24 10:17:12
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