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luoziwei

新虫 (正式写手)

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[求助] 琼脂糖克隆实验 Soft Agar Colony Formation Assay已有1人参与

请教，Soft Agar Colony Formation Assay培养15天后，肉眼可见克隆团，但不知道怎么拍照才算合格，问一下有没有人做过？求交流

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1楼2012-06-13 21:21:39

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艾叶米虫

铜虫 (小有名气)

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专业: 抗肿瘤药物药理

你好，我想做软琼脂糖克隆实验，结肠癌细胞株HT29. 我的步骤是这样的：1：二次水配制 1.2%及 0.6% 低熔点琼脂糖。
2：2X McCoy’s 5A 培养基，加入 20% FBS 及 2X 双抗。与 1.2% 低熔点琼脂糖 1:1 混合，加入 1.4ml 于6孔板中，室温放至凝固。
3：消化HT29细胞，计数为 10^4/ml 。2X培养基：0.6% 低熔点琼脂糖=1：1，取混合液 1 ml 与 100ul 细胞悬液混匀，加入上层。
4：37度，5% CO2 培养。
结果：a:上层琼脂糖不凝固。
b:细胞不贴壁
c:细胞在第三天全死了
疑问：1：上层为什么不凝固呢？
2：加入细胞时是先加入上层低熔点琼脂糖再加细胞，还是细胞和上层低熔点琼脂糖混匀后再加入上册呢？
3：步骤我的有哪里不对？求解！求指导！求指示！
转眼研三可是我这样的实验都无从下手，求指导！万谢！！