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emma立夏

铁虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 20
帖子: 36
在线: 10小时
虫号: 1314207
注册: 2011-06-03
性别: MM
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 报告基因GFP的检测方法

各位战友，大家有没有做过GFP检测的呢？本人是构建了一个pEGFP-N1的重组质粒，里面插入了目的基因，转化酵母后，接下来要做GFP的检测和表达了。关于荧光方面，深层的原理不是很清楚，然后现在就是收集到一些可以用来检测荧光的方法，我先述说收集的方法，，也在这里做个小小总结如下：
1.GENios Plus多功能酶标仪【定量】
2.紫外分光光度计【定量】
3.流式细胞仪【定量】
4.荧光显微镜【定性】
希望有过此类经验的战友们，都能提提宝贵的意见以及自己的经验。
也为将来做这些方面的朋友们留下一份可以借鉴的帖子吧~~欢迎大家八仙过海各显其能~~期待你们的回帖~~！！

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1楼2012-06-12 21:18:07

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whwshzdx

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 7.5
帖子: 2
在线: 52分钟
虫号: 1861675
注册: 2012-06-16
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

现在你的基因应该插入在多克隆点上？不知道你的基因带终止密码子不，如果带有可能悲剧，egfp在其后面是不会表达的，双基因的表达最好用Pires2-egfp质粒，ires可以起始转录。现在可能说你的基因表达了，egfp没有表达没有荧光，流式细胞仪【定量】、荧光显微镜【定性】都是筛荧光，看荧光的，这些仪器都很贵我这只有荧光显微镜。拿着你的质粒先去做转染，用荧光显微镜看下情况。