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rainbow8

新虫 (小有名气)

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[求助] 连接前等摩尔加入两个片段的问题

相对分子质量比M1:M2=1:11 质量浓度即密度比为p1:p2=5:1 我连接的时候两个片段该加多少啊

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学海无涯，回头是岸

1楼 2012-06-06 10:20:18

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547star

木虫 (著名写手)

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专业: 系统生物学

【答案】应助回帖

等摩尔的话,相对分子量大的加入的体积是小的55倍.举例，不考虑碱基分子量和含量差异，如果你的载体是2686bp的pUC18,插入片段是244bp，pUC18的浓度是20ng/ul,插入片段浓度是100ng/ul，等摩尔的话，连接体系10ul，加5.5ul的pUC18，加0.1ul的插入片段。实际上，连接体系一般建议插入片段是载体的3倍，甚至更高。如果实际情况是插入片段很大，得到的浓度很小，你可以考虑加小体积的载体，插入片段想办法浓缩提高浓度，加大连接体积。