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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接前等摩尔加入两个片段的问题
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查看: 2006  |  回复: 6
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rainbow8

新虫 (小有名气)

[求助] 连接前等摩尔加入两个片段的问题

相对分子质量比M1:M2=1:11 质量浓度即密度比为p1:p2=5:1   我连接的时候两个片段该加多少啊
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学海无涯，回头是岸
1楼 2012-06-06 10:20:18
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 19:03:12
相对分子质量在数值上等于摩尔质量，但单位不同。相对分子质量的单位是1 ，而摩尔质量的单位是g/mol。 密度g/ml。换算一下嘛
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2012-06-06 18:31:15
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般外援片段的分子数是载体分子数的3-10倍。
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3楼2012-06-06 21:32:23
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rainbow8

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-06-06 21:32:23
一般外援片段的分子数是载体分子数的3-10倍。

这个是怎么讲呢？
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学海无涯，回头是岸
4楼2012-06-07 20:52:33
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suifeng91

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-11 13:58:23
这个意思是：通常载体的长度比外源片段的长度长，所以，在连接反应体系中，后者物质的量要比前者多，摩尔比是前者的3~10倍，这样可以提供连接成功的效率。
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人生不是一场物质的盛宴，而是一次灵魂的修炼，使它在谢幕之时比开幕之初更为高尚。
5楼2012-06-11 10:46:27
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dafeizizhu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

把你要连接的两个片段都换算成mol的量，然后按照3-10:1的比例加，用T4 DNA Ligase  4度过夜反应就好。
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6楼2012-06-11 11:52:00
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

等摩尔的话,相对分子量大的加入的体积是小的55倍.举例，不考虑碱基分子量和含量差异，如果你的载体是2686bp的pUC18,插入片段是244bp，pUC18的浓度是20ng/ul,插入片段浓度是100ng/ul，等摩尔的话，连接体系10ul，加5.5ul的pUC18，加0.1ul的插入片段。实际上，连接体系一般建议插入片段是载体的3倍，甚至更高。如果实际情况是插入片段很大，得到的浓度很小，你可以考虑加小体积的载体，插入片段想办法浓缩提高浓度，加大连接体积。
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为什么
7楼2012-06-11 15:03:39
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