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rainbow8

新虫 (小有名气)

[求助] 连接前等摩尔加入两个片段的问题

相对分子质量比M1:M2=1:11 质量浓度即密度比为p1:p2=5:1   我连接的时候两个片段该加多少啊
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

等摩尔的话,相对分子量大的加入的体积是小的55倍.举例,不考虑碱基分子量和含量差异,如果你的载体是2686bp的pUC18,插入片段是244bp,pUC18的浓度是20ng/ul,插入片段浓度是100ng/ul,等摩尔的话,连接体系10ul,加5.5ul的pUC18,加0.1ul的插入片段。实际上,连接体系一般建议插入片段是载体的3倍,甚至更高。如果实际情况是插入片段很大,得到的浓度很小,你可以考虑加小体积的载体,插入片段想办法浓缩提高浓度,加大连接体积。
为什么
7楼2012-06-11 15:03:39
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