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xiacongmin

金虫 (小有名气)

[求助] F-7000 日立荧光分光光度计:关于时间扫描模式,荧光值不稳定的原因的问题

我现在正在用日立的F-7000来检测伏马毒素,伏马毒素本身没有荧光,用OPA试剂衍生后再来测,但衍生后的化合物不稳定,荧光会随着时间衰减。
伏马毒素是溶于乙腈:水=1:1的溶液中的。所以我配制了一系列浓度的伏马毒素标准溶液,空白是乙腈水(因为空白与OPA试剂衍生后也有荧光,但低于系列浓度的伏马毒素衍生后的荧光值)。然后对分别空白和系列浓度的伏马毒素衍生后进行时间扫描。分别计算前30S的荧光平均值,再绘制标准曲线。
问题是每次的的标准曲线结果都比较好(相关系数能到0.99以上,),但是每天和每天测的荧光值有一定差别,就是曲线方程不一样。
这是因为是有系统误差呢?还是荧光受条件因素较多,所以每次的都不一样呢?
还有就是我应该怎样来调零和扣除空白呢?
时间扫描模式下有必要调零和扣除空白吗?
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xiacongmin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chaijudi at 2012-06-04 10:02:10
你不要光看荧光强度,既然你是做线性的,那你就看每次曲线的斜率是否相同就可以了。
影响荧光强度的因素太多了,还有你能够确保你每次衍生实验完成后所得到的产物都一样么!

不能保证,操做过程都是一样的。只能是说反应的程度不知道怎样。
斜率不是完全相同,相差不多。
我有没有必要在不同的天,每测一组样品就建一条标曲呢?
诚实做人,认真做事;一份耕耘,一份收获。
3楼2012-06-04 10:19:42
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你不要光看荧光强度,既然你是做线性的,那你就看每次曲线的斜率是否相同就可以了。
影响荧光强度的因素太多了,还有你能够确保你每次衍生实验完成后所得到的产物都一样么!
2楼2012-06-04 10:02:10
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

必要在不同的天,每测一组样品就建一条标曲
4楼2012-06-04 11:19:43
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linkaiglk

金虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chaijudi at 2012-06-04 11:19:43
必要在不同的天,每测一组样品就建一条标曲

问个问题哈,加入想用荧光光谱测定仪中荧光小肽的量,但是这种荧光小肽还没有完全纯化,也就是说没有标准品,那这种情况下应该怎么惊醒定量分析呢?
5楼2013-03-23 14:27:07
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