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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大片段连接
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lwq652

木虫 (正式写手)

[求助] 大片段连接

我有一个很大的片段，5k多，但是载体也就5k多，连接了一个多月了还是连不上，请问有没有什么好方法或者好的试剂（盒）可以把类似于我这样的条件的片段连接的。我现在用的是酶切连接。目标序列都是已知的，谢谢啦
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一念错，便觉百行皆非，防之当如渡海浮囊，勿容一针之罅漏
1楼 2012-06-03 00:33:57
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AnaSequence

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最近连了一个接近4KB的，挑了7个白的，只有2个大小接近可能是，送测序了。其他还有1个是连了一个小片段的假阳性的，4个估计都是两个载体片段连起来的。
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11楼2012-06-05 22:35:14
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roger077

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-03 20:29:31
lwq652: 金币+2 2012-06-03 21:56:53
你可以尝试一下利用同源重组克隆技术的试剂盒，应该是可以，之前我用过金斯瑞的试剂盒，还不错，另外clontech也有这种盒子，不过比较贵
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2楼2012-06-03 15:37:00
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
怎么知道没连接上呢
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3楼2012-06-03 22:24:12
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 有道理~虽然麻烦点，分步连接也是个可选的方法 2012-06-05 08:32:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by gongeleven at 2012-06-03 22:24:12
怎么知道没连接上呢

根据5K片段里的酶切位点 ，把它弄成两段或三段，然后一段一段的连
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4楼2012-06-04 08:43:49
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