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luck-lhan

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[求助] 水稻转基因鉴定

最近在做转基因水稻鉴定，CTAB提取水稻基因组DNA，PCR扩增GUS片段，为什么没有转基因的对照也能扩增出条带，并且大小和GUS片段差不多，哪位高手帮忙解释下，谢谢！

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1楼 2012-05-28 14:08:35

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wiln1

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jhu132llh: 金币+3, APEPI+1, 鼓励积极应助交流 2012-05-28 20:39:28

这种情况可能的原因很多：
1.可能在提取过程中被转基因样品污染或者PCR加样时有交叉污染。
2.设计的引物特异性怎么样。
3.实验室的空气中由于长期的PCR操作也有污染，有人用不加模板的体系都能扩出带来。
4.你能确定对照是没有转基因的吗？可以换换对照。
应该还有其他原因，我暂时能想到的就这些。

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2楼2012-05-28 15:27:27

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luck-lhan

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引用回帖:

2楼: Originally posted by wiln1 at 2012-05-28 15:27:27
这种情况可能的原因很多：
1.可能在提取过程中被转基因样品污染或者PCR加样时有交叉污染。
2.设计的引物特异性怎么样。
3.实验室的空气中由于长期的PCR操作也有污染，有人用不加模板的体系都能扩出带来。
4.你能 ...

1.交叉污染应该不存在，分别提取的多个对照，都有GUS条带，
2.这对引物在转基因拟南芥上用过，特异性较好，而且转基因的有GUS条带，非转基因的没有。
3，做了2年的PCR了，至少这种情况还没遇见过，
4，确定一定以及肯定对照是没转基因的

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3楼2012-05-29 09:00:35

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