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dshlove

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化牛肠激酶过程中遇到的问题

这几天一直在做肠激酶的纯化,708bp,是肠激酶的轻链部分。感受态细胞是BL21(DE3)。15℃ 0.5mM IPTG  诱导过夜。收菌破碎后可溶性很差,基本全在沉淀中。buffer中是0.5M的NaCl。而根本就不傍柱子,上清中和Flowthrough中都有目的蛋白条带。所以现在想知道是不是形成了包涵体。不知能不能用变复性方法去做?大家给点想法啊。有什么需要补充的请提问。谢谢
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liujian1987

金虫 (正式写手)

纯化时,先微滤,后超滤,目标蛋白消失,有碰到过这种情况嘛?还有发酵后酶纯度不够,达不到95%的目标值,不知道啥原因呢
3楼2018-12-20 15:13:49
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