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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB显影结果分析
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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

[交流] WB显影结果分析

我所做蛋白，说明书上说分子量为70KD。发表的文章上作出的分子量也不是很一致，有的在80KD，有的90KD，还有100KD，样本都是大鼠的。师姐用细胞样品做现出来的条带在70-100KD间属于正常范围内，我做是大鼠样本，每次WB显影出的条带分子量都稍微小于70KD，与实际分子量有点不符，我跟师姐所用抗体浓度一样，不知道所显出来的条带是不是我的目的条带呢？
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1楼 2012-05-24 14:24:38
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good！辛苦哈~ 2012-05-24 23:45:27
做个质谱测两者分子量，再分别用用红外和紫外测一下两者的二级和三级结构，比较一下就可以知道。以Ediman降解为原理的自动多肽测序仪一般无法直接测定多肽的氨基酸侧链修饰，用质谱测序能够测出，但是那样测序比用自动测序仪还贵，用质谱测蛋白质的分子量并不贵。
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6楼2012-05-24 23:20:15
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aixia5

金虫 (小有名气)
★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
有钱的话，可以送去测氨基酸序列，不过费用特别高，不是一般实验室能接受的。
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3楼2012-05-24 16:03:40
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)
★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
是不是蛋白发生变性造成的？
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5楼2012-05-24 22:31:37
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 辛苦了哈 2012-05-25 13:47:32
用肽谱分析也可以，如果两者蛋白质的主链相同，但是一者侧链存在修饰，可以用肽谱分析方法大致知道修饰位点在一级结构的哪段，这样可以有针对性对该段序列进行精确测定，可以用质谱分析，也可以用化学分析方法。具体实验的Protocols，包括eptide mapping,请见：T.E.Creighton edit, Protein structure-----A Practical Approach,Oxford University Press,1997.
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7楼2012-05-25 00:50:56
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