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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 滚环扩增实验条件
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kedafy

新虫 (小有名气)

[求助] 滚环扩增实验条件 已有1人参与

最近做一个最基本的滚环扩增实验，不知道为什么没有现象，请高手指点一二。
circle DNA是宝生物公司合成环化好的，primer DNA是一段16-mer的序列。我的实验条件如下：1、1.5µL circle DNA(0.05 µM)与1.5 µL primer（0.5 µM）和6.0 µL DDW混合加热至55度后缓慢降温至37度，保持1 h。
2、在上述溶液中加入1 µL phi29 DNA polymerase （10 u/µL）, 2 µL 聚合酶自带buffer，3 µL dNTP，37度反应1 h。
3、加热至65度反应10 min，使酶失活。
我的实验条件存在什么重大问题吗？
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1楼 2012-05-24 10:15:17
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kedafy

新虫 (小有名气)
我打的是微升，不能识别。µ是微升
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2楼2012-05-24 10:17:26
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beyond-ower

木虫 (著名写手)
为什么要加热到65℃，使酶失活?
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超越才能立足
3楼2014-08-13 20:30:04
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守护天使nxl

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还在做滚环的实验吗，有些问题想请教一下
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4楼2015-09-28 19:59:42
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141320209

新虫 (初入文坛)
您好！请问您的环PADLOCK是合成好的吗？
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5楼2016-06-29 11:19:33
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