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滚环扩增实验条件 已有1人参与
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最近做一个最基本的滚环扩增实验，不知道为什么没有现象，请高手指点一二。 circle DNA是宝生物公司合成环化好的，primer DNA是一段16-mer的序列。我的实验条件如下：1、1.5µL circle DNA(0.05 µM)与1.5 µL primer（0.5 µM）和6.0 µL DDW混合加热至55度后缓慢降温至37度，保持1 h。 2、在上述溶液中加入1 µL phi29 DNA polymerase （10 u/µL）, 2 µL 聚合酶自带buffer，3 µL dNTP，37度反应1 h。 3、加热至65度反应10 min，使酶失活。 我的实验条件存在什么重大问题吗？ |
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