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a317236770

木虫 (小有名气)

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[求助] 考马斯亮蓝测蛋白质

1.考马斯亮蓝法测蛋白质含量的发明者用牛血清蛋白作为标准蛋白质溶液，我可以用待测液中的蛋白质做标准液吗？
2.为什么要在595nm下测吸光度，不同蛋白质染色后，最大吸收波长不会改变吗？我的明胶溶液染色后扫描出最大吸收波长为585nm。
3.此方法的测定范围是1--1000μg/ml，如果我要测定的溶液中蛋白质含量超出此范围，可以用蒸馏水直接稀释到此范围吗？

[ Last edited by a317236770 on 2012-5-22 at 21:12 ]

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1楼 2012-05-22 21:02:49

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colorfulmiao

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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a317236770: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 谢谢你的帮助！ 2012-05-25 14:58:46

2 用595nm是因为考马斯与蛋白结合后的最大吸收波长位于595 与考马斯有关的和蛋白影响不大
4. 黄原胶没用过但是你可以先用它与考马斯试一下 1mL考马斯加20uL黄原胶什么的观察颜色变化如果显著变色说明影响很大
5 不用缓冲盐配制标准蛋白没问题我就是用纯水配制的缓冲溶液是起到保护蛋白的作用但我测蛋白浓度时候样品蛋白是用纯水溶解的因此标准蛋白也是纯水溶解看你的样品中含有什么物质了标准蛋白一般都是配好分装 -20℃保存做一次拿一管用完用不完都扔掉
祝实验成功~