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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎么表征磁珠上修饰上了蛋白呢？
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wjjia

金虫 (小有名气)

[交流] 怎么表征磁珠上修饰上了蛋白呢？

怎么表征磁珠上修饰上了蛋白呢？
与磁珠偶联之后的蛋白上清液用bradford法测定，但是感觉不准确，不知道有什么方法可以对磁珠上偶联的蛋白进行定量或者定性分析也可？拜托
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1楼 2012-05-21 10:10:32
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李通1129

银虫 (小有名气)
★
wjjia(金币+1): 谢谢参与
太专业了，不知道。望高人尽快给你答复！！！！！！！！
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2楼2012-05-21 10:19:23
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mascotte

金虫 (正式写手)
★
wjjia(金币+1): 谢谢参与
用蛋白电泳buffer煮珠子，如果有蛋白应该游离出来，之后跑sds-page胶，用考马斯蓝染色
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3楼2012-05-21 15:58:59
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wjjia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mascotte at 2012-05-21 15:58:59:
用蛋白电泳buffer煮珠子，如果有蛋白应该游离出来，之后跑sds-page胶，用考马斯蓝染色

不过我需要用修饰上的蛋白哦，让蛋白游离出来就没办法做下一步喽，很感谢
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4楼2012-05-22 14:15:53
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脚踏飞猪

铜虫 (初入文坛)
★
wjjia(金币+1): 谢谢参与
用考马斯亮蓝测试不准的，因为EDC反应后的副产物也会被染色，影响测试结果，而且影响很大
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wjjia
5楼2012-05-23 10:58:51
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wjjia

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 脚踏飞猪 at 2012-05-23 10:58:51:
用考马斯亮蓝测试不准的，因为EDC反应后的副产物也会被染色，影响测试结果，而且影响很大

哦，这样啊，非常感谢哦
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6楼2012-05-24 09:04:20
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mascotte

金虫 (正式写手)
★ ★
yqbter: 金币+2, 专业的回答！！ 2012-05-25 10:05:51
并不是要用全部的磁珠做电泳，你制备100体积的珠子，取1~10体积的珠子检测蛋白的纯度和浓度是必须的吧，下游的实验也需要这样的control作为指标。分子生物学用作蛋白相互作用的有葡聚糖珠，制备的时候也是这样检测的，你可以参考这方面的实验技术。至于考马斯蓝蛋白染色是很经典的实验方法，国内国外都在用，没什么过时的说法。broadford本身的染料也是考马斯蓝。不过你对蛋白质电泳这方面好像不太懂，建议你问问身边做生物的具体的细节
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wjjia
7楼2012-05-24 20:59:19
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wjjia

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by mascotte at 2012-05-24 20:59:19:
并不是要用全部的磁珠做电泳，你制备100体积的珠子，取1~10体积的珠子检测蛋白的纯度和浓度是必须的吧，下游的实验也需要这样的control作为指标。分子生物学用作蛋白相互作用的有葡聚糖珠，制备的时候也是这样检测的

好的，非常感谢哦
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8楼2012-05-25 08:33:45
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clcl88

银虫 (小有名气)
★
wjjia(金币+1): 谢谢参与
请问楼主最好是怎么解决的啊？本人也遇到这种问题，求教啊
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9楼2014-11-14 10:21:04
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