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myitcat

新虫 (初入文坛)

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[求助] gataway LR 反应宿主菌选择

现在在用gataway系统构建转基因质粒，LR反应后将全部反应液（10ul）转化进了JM109内，挑取的菌落PCR check 总是显示阴性。
请问是否JM109不合适？DH5α可以胜任吗？
目前在用LR clonase ii plus做三片段连接，总是失败，实在不知道还有哪里会有问题，烦请师兄师姐们指点一二

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1楼 2012-05-17 16:57:04

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aiweiyiren

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by mengmenglu at 2012-05-23 09:24:03
昨天发现我的LR酶没有了，昨天定了，要2-3个星期才能到呢。我的质粒是自己构建的入门克隆载体呀，应该没有关系吧。。。
挑菌的时候是所有的都挑了，因为一个板就没有长几个。呵呵，下次啊注意看下透明菌落。谢谢你 ...

你们构建的入门克隆载体的attB和目的载体的相同吗