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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » gataway LR 反应宿主菌选择
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myitcat

新虫 (初入文坛)

[求助] gataway LR 反应宿主菌选择

现在在用gataway系统构建转基因质粒，LR反应后将全部反应液（10ul）转化进了JM109内，挑取的菌落PCR check 总是显示阴性。
      请问是否JM109不合适？DH5α可以胜任吗？
      目前在用LR clonase ii plus做三片段连接，总是失败，实在不知道还有哪里会有问题，烦请师兄师姐们指点一二
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1楼 2012-05-17 16:57:04
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aiweiyiren

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般作LR反应会转DH5α感受态，转TOP10的话，长斑基本是空载，DH5α长斑基本都是对的，我们公司一直在转DH5α，你也可以试试STBL2.
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8楼2012-06-02 22:54:02
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们组都是用TOP 10，DH5α也可以，没用过JM109
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-05-17 18:27:55
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myitcat

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-05-17 18:27:55:
我们组都是用TOP 10，DH5α也可以，没用过JM109

谢谢！
我决定下次分别用TOP 10、DH5α转一下。
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3楼2012-05-18 10:49:10
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mengmenglu

金虫 (小有名气)
我在做LR反应的时候，是转到DH5α的，挑菌摇菌，送测序就是测不出来东西。郁闷的要命，都做了两次转化了。。。
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4楼2012-05-19 16:06:00
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