24小时热门版块排行榜    

查看: 1902  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

myitcat

新虫 (初入文坛)

[求助] gataway LR 反应宿主菌选择

现在在用gataway系统构建转基因质粒,LR反应后将全部反应液(10ul)转化进了JM109内,挑取的菌落PCR check 总是显示阴性。
      请问是否JM109不合适?DH5α可以胜任吗?
      目前在用LR clonase ii plus做三片段连接,总是失败,实在不知道还有哪里会有问题,烦请师兄师姐们指点一二
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myitcat

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mengmenglu at 2012-05-19 16:06:00:
我在做LR反应的时候,是转到DH5α的,挑菌摇菌,送测序就是测不出来东西。郁闷的要命,都做了两次转化了。。。

我已经做了大约八次LR了。
挑的菌落经常提不出质粒。
昨天看了篇文献说LR转化后要选透明菌落,下次你试一下吧。
另外你昨LR用的几种质粒是相同来源吗?
invitrogen的技术支持说如果质粒来源不同,可能会不兼容。
我现在就有3个质粒是别人给的,一个是我自己合成的。
5楼2012-05-22 12:39:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们组都是用TOP 10,DH5α也可以,没用过JM109
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2012-05-17 18:27:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myitcat

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-05-17 18:27:55:
我们组都是用TOP 10,DH5α也可以,没用过JM109

谢谢!
我决定下次分别用TOP 10、DH5α转一下。
3楼2012-05-18 10:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengmenglu

金虫 (小有名气)

我在做LR反应的时候,是转到DH5α的,挑菌摇菌,送测序就是测不出来东西。郁闷的要命,都做了两次转化了。。。
4楼2012-05-19 16:06:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0805 316求调剂 +6 大雪深藏 2026-03-18 6/300 2026-03-24 22:13 by peike
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 0854电子信息求调剂 +6 α____ 2026-03-22 7/350 2026-03-24 19:46 by sunjie8888
[考研] 085602 289分求调剂 +5 WWW西西弗斯 2026-03-24 5/250 2026-03-24 18:51 by jhhcooi
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 316求调剂 +7 梁茜雯 2026-03-19 7/350 2026-03-23 16:21 by lingjue
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕,总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
信息提示
请填处理意见