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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，求助，分子基础知识
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 求助，求助，分子基础知识

问一些比较低级的问题，部分是胡思乱想的。
情况：外源基因导入感受态细胞，最简单常规的转化方法，不用基因枪啥的直接打进去。
1）外源基因和载体链接，转化Ecoli。为什么非要链接载体？线性的DNA就不能进去了？即使链接到载体上，suoper coiled DNA vector也不是要解链变成线性单链DNA后才进入细胞，另一条留在胞外不是？何苦跟载体连接成那么大的链才进去？

2）以下四种DNA哪个更容易进入细胞？双链环状，单链环状，双链线性，单链线性. 转化前，ligation之后的DNA 不知道能不能按以上状态存在，就当是假设也行。

3）双链环状超螺旋DNA进入细胞之前据说要解链变成单链线性（网上查的,不知对错），那究竟在什么位点切割成线性？所有质粒都在同一位点么？

4）有没有以下可能：外源基因和载体没有连上，但而这都被转进细胞了？或者只有其中一个转进细胞了？还表达了如抗性基，lacZ基因等情况？

5）有没有另一种可能：外源基因与载体一端连接成功，另一端未连上，但却转入细胞了，还表达了各种筛选基因，因而假装阳性克隆滥竽充数的？

6）线性质粒就不能在细胞中正常存在，复制，转录，遗传吗？非要呈环状吗？


多谢各位哈~~~尽量给个完整的答案吧，回答部分问题也行，但是我确实想整明白。

50分期，有答必有币~~~追赏！
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向钱看，向厚赚
1楼 2012-05-17 02:33:06
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gaowei706

铁杆木虫 (职业作家)

资深潜水者
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 应助指数-1 2012-05-17 08:29:39
楼主应该好好看看分子生物学或分子遗传学教材，书里内容都可以解答你的这些问题。你有这些问题是因为你没搞清楚载体和Ecoli的特点
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逐渐失去棱角
4楼2012-05-17 08:26:16
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)
沙发是我的
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向钱看，向厚赚
2楼2012-05-17 02:34:02
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
懒蛋: 金币+10, ★有帮助, 谢谢~关注的都给分，尽管你的回答跟没答似的 2012-05-17 13:49:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:43:14
楼主问题都挺有意思的，
外源基因和载体链接，转化Ecoli，如果不连接，外源基因片段很容易被Ecoli体内的酶消化掉的。
其它问题我也等答案哦
赞一下 回复此楼
转向地质微生物学
3楼2012-05-17 08:05:45
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
懒蛋: 金币+10, ★有帮助, 谢谢关注。看来好多问题我得跟大肠杆菌直接沟通 2012-05-17 13:53:12
建议楼主多看看分子生物学，微生物学及分子克隆。至于纠结于线性还是环状质粒的话，这要看大肠杆菌的核酸外切酶让不让你的线性存在了。。。
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5楼2012-05-17 10:31:20
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