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懒蛋铁杆木虫 (著名写手)
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[求助]
求助，求助，分子基础知识
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问一些比较低级的问题，部分是胡思乱想的。 情况：外源基因导入感受态细胞，最简单常规的转化方法，不用基因枪啥的直接打进去。 1）外源基因和载体链接，转化Ecoli。为什么非要链接载体？线性的DNA就不能进去了？即使链接到载体上，suoper coiled DNA vector也不是要解链变成线性单链DNA后才进入细胞，另一条留在胞外不是？何苦跟载体连接成那么大的链才进去？ 2）以下四种DNA哪个更容易进入细胞？双链环状，单链环状，双链线性，单链线性. 转化前，ligation之后的DNA 不知道能不能按以上状态存在，就当是假设也行。 3）双链环状超螺旋DNA进入细胞之前据说要解链变成单链线性（网上查的,不知对错），那究竟在什么位点切割成线性？所有质粒都在同一位点么？ 4）有没有以下可能：外源基因和载体没有连上，但而这都被转进细胞了？或者只有其中一个转进细胞了？还表达了如抗性基，lacZ基因等情况？ 5）有没有另一种可能：外源基因与载体一端连接成功，另一端未连上，但却转入细胞了，还表达了各种筛选基因，因而假装阳性克隆滥竽充数的？ 6）线性质粒就不能在细胞中正常存在，复制，转录，遗传吗？非要呈环状吗？ 多谢各位哈~~~尽量给个完整的答案吧，回答部分问题也行，但是我确实想整明白。 50分期，有答必有币~~~追赏！  |
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3楼2012-05-17 08:05:45
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