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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 求助,求助,分子基础知识

问一些比较低级的问题,部分是胡思乱想的。
情况:外源基因导入感受态细胞,最简单常规的转化方法,不用基因枪啥的直接打进去。
1)外源基因和载体链接,转化Ecoli。为什么非要链接载体?线性的DNA就不能进去了?即使链接到载体上,suoper coiled DNA vector也不是要解链变成线性单链DNA后才进入细胞,另一条留在胞外不是?何苦跟载体连接成那么大的链才进去?

2)以下四种DNA哪个更容易进入细胞?双链环状,单链环状,双链线性,单链线性. 转化前,ligation之后的DNA 不知道能不能按以上状态存在,就当是假设也行。

3)双链环状超螺旋DNA进入细胞之前据说要解链变成单链线性(网上查的,不知对错),那究竟在什么位点切割成线性?所有质粒都在同一位点么?

4)有没有以下可能:外源基因和载体没有连上,但而这都被转进细胞了?或者只有其中一个转进细胞了?还表达了如抗性基,lacZ基因等情况?

5)有没有另一种可能:外源基因与载体一端连接成功,另一端未连上,但却转入细胞了,还表达了各种筛选基因,因而假装阳性克隆滥竽充数的?

6)线性质粒就不能在细胞中正常存在,复制,转录,遗传吗?非要呈环状吗?


多谢各位哈~~~尽量给个完整的答案吧,回答部分问题也行,但是我确实想整明白。

50分期,有答必有币~~~追赏!
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向钱看,向厚赚
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
懒蛋: 金币+10, 有帮助, 谢谢~关注的都给分,尽管你的回答跟没答似的 2012-05-17 13:49:39
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-17 14:43:14
楼主问题都挺有意思的,
外源基因和载体链接,转化Ecoli,如果不连接,外源基因片段很容易被Ecoli体内的酶消化掉的。
其它问题我也等答案哦
转向地质微生物学
3楼2012-05-17 08:05:45
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懒蛋

铁杆木虫 (著名写手)

沙发是我的
向钱看,向厚赚
2楼2012-05-17 02:34:02
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gaowei706

铁杆木虫 (职业作家)

资深潜水者

感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 应助指数-1 2012-05-17 08:29:39
楼主应该好好看看分子生物学或分子遗传学教材,书里内容都可以解答你的这些问题。你有这些问题是因为你没搞清楚载体和Ecoli的特点
逐渐失去棱角
4楼2012-05-17 08:26:16
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
懒蛋: 金币+10, 有帮助, 谢谢关注。看来好多问题我得跟大肠杆菌直接沟通 2012-05-17 13:53:12
建议楼主多看看分子生物学,微生物学及分子克隆。至于纠结于线性还是环状质粒的话,这要看大肠杆菌的核酸外切酶让不让你的线性存在了。。。
5楼2012-05-17 10:31:20
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