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duyumeng1989

新虫 (初入文坛)

[求助] C18柱柱压高,高水相和高有机相冲洗,压力均不降

新买的迪马C18柱测定生物样本,使用不到一个月,岛津的色谱仪,有预柱;
有一次使用磷酸二氢钾的缓冲液(PH3.0):乙腈(15:85)作为流动相,流速从0.2ml/min直接升到了1,压力突然升高,立即停泵,用乙腈-水(10:90)冲洗,当时压力已经降下来了,继续用乙腈-水以0.2的流速过夜以后,第二天早上来,压力又升高了,
已经试过用90%水-乙腈,90%水-甲醇,纯乙腈,纯甲醇冲洗,柱压都没降下来;
发现用0.2%的醋酸水溶液做水相的时候,压力下降2-3MPa,但换成水以后,又会有上升趋势,
到底是缓冲盐析出了,还是别的东西堵了啊,为什么我冲了这么久,柱压还是不降啊;各位大侠救命啊~~~
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duyumeng1989

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-05-15 21:27:07:
既然有预柱,直接卸下预柱,取柱芯,异丙醇超声清洗或更换即可。

预柱换了新柱芯,柱套也超声过了,现在预柱压力大约3MPa,
3楼2012-05-15 21:33:17
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duyumeng1989

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-05-15 21:40:31:
1。是否排除流动相组分及流速变化,引起管路中流动相粘度变化,进而引起压力变化。
2。确定到底是管路有盐析出抑或是色谱柱有污染致使压力偏高。(卸下色谱柱后检查压力判断)
3。若非色谱柱原因,检查管路配件 ...

非常感谢您的帮助,应该是色谱柱的问题,因为我不接柱子,压力只有0.5MPa,只接柱子不接检测器,压力也不会下降,明天用异丙醇冲试试,另外,我疑惑的是,醋酸和水做水相,压力会有2-3MPa的差别吗?还是说可能是我的柱子里有什么杂质是需要酸才能冲出来的?
5楼2012-05-15 21:53:57
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duyumeng1989

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2012-05-15 21:40:31:
1。是否排除流动相组分及流速变化,引起管路中流动相粘度变化,进而引起压力变化。
2。确定到底是管路有盐析出抑或是色谱柱有污染致使压力偏高。(卸下色谱柱后检查压力判断)
3。若非色谱柱原因,检查管路配件 ...

亲~~~异丙醇冲洗无效啊亲~~我的柱子不会是报废了吧~~~
6楼2012-05-16 14:43:43
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duyumeng1989

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dingjinglvde at 2012-05-16 15:02:00:
可能是色谱柱的滤网脏了
需要清洗,或采用不同极性流动相长时间冲洗

我昨晚用10、30、50、70、90、100%的乙腈各冲了80min,压力未降
8楼2012-05-16 15:09:35
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duyumeng1989

新虫 (初入文坛)

非常感谢大家的帮助,我咨询了客服,说我的可能是残留的蛋白质与缓冲盐结合后,沉淀在柱子里了,建议我用0.1%三氟乙酸冲洗,效果还不错,柱压又降低,虽然没完全降至以前,柱效也挺好,
15楼2012-05-22 09:07:29
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