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sun880806

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何测定未知肽的测定方法?

本人纯化得到一种活性肽,浓度估计1mg/mL,量很少,只有5mL,现在想测一下它的具体浓度,该选择什么方法呢? 考虑了凯氏定氮、双缩脲、福林酚、考马斯等方法,均不行,愁死了,求高人指点
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小硕
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sun880806: 金币+10, 有帮助 2012-05-15 10:09:33
sun880806: 金币+10, 有帮助 2012-05-17 00:52:28
hsd3521: 金币+1, 食品EPI+1, 感谢应助,谢谢,奖励食品EPI,欢迎常来食品版 2012-05-18 08:00:39
现在有两个办法:
1、用凯氏定氮法的时候,你可以将滴定盐酸的浓度降低——0.01mol/L,这样1可能你就能测出来了,帮你算了一下,大概消耗盐酸的量是7-8mL。
2、用SDS-PAGE琼脂糖凝胶电泳的方法来测定,可以通过marker确定出你的活性肽的肽链数,而且通过光密度计可以达到你测量浓度的目标。但是这个对于仪器的要求较高。
在下就想到两种解决的办法,希望对你有用了!
3楼2012-05-15 09:31:44
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
写明为什么不行呀,溶剂影响还是肽本身性质?
亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
2楼2012-05-15 08:56:48
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sun880806

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ssdghf at 2012-05-15 09:31:44:
现在有两个办法:
1、用凯氏定氮法的时候,你可以将滴定盐酸的浓度降低——0.01mol/L,这样1可能你就能测出来了,帮你算了一下,大概消耗盐酸的量是7-8mL。
2、用SDS-PAGE琼脂糖凝胶电泳的方法来测定,可以通过 ...

非常感谢,您说的这两点我以前没有考虑过,我会仔细考虑一下的。
小硕
4楼2012-05-15 10:15:46
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sun880806

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-05-15 08:56:48:
写明为什么不行呀,溶剂影响还是肽本身性质?

你好,凯氏定氮、双缩脲是灵敏度的问题,我的样品浓度小,而且很少,所以不适合这两种方法;福林酚、考马斯发生的显色反应都是跟特定种类的氨基酸发生的反应,我的样品是功能性短肽,发生相应显色反应的氨基酸比例未知,结果偏差估计会很大
小硕
5楼2012-05-15 10:21:17
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