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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 如何测定未知肽的测定方法？
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sun880806

铜虫 (小有名气)

[求助] 如何测定未知肽的测定方法？

本人纯化得到一种活性肽，浓度估计1mg/mL，量很少，只有5mL，现在想测一下它的具体浓度，该选择什么方法呢？ 考虑了凯氏定氮、双缩脲、福林酚、考马斯等方法，均不行，愁死了，求高人指点
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小硕
1楼 2012-05-15 02:05:56
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
写明为什么不行呀，溶剂影响还是肽本身性质？
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亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
2楼2012-05-15 08:56:48
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ssdghf

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sun880806: 金币+10, ★有帮助 2012-05-15 10:09:33
sun880806: 金币+10, ★有帮助 2012-05-17 00:52:28
hsd3521: 金币+1, 食品EPI+1, 感谢应助，谢谢，奖励食品EPI，欢迎常来食品版 2012-05-18 08:00:39
现在有两个办法：
1、用凯氏定氮法的时候，你可以将滴定盐酸的浓度降低——0.01mol/L，这样1可能你就能测出来了，帮你算了一下，大概消耗盐酸的量是7-8mL。
2、用SDS-PAGE琼脂糖凝胶电泳的方法来测定，可以通过marker确定出你的活性肽的肽链数，而且通过光密度计可以达到你测量浓度的目标。但是这个对于仪器的要求较高。
在下就想到两种解决的办法，希望对你有用了！
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3楼2012-05-15 09:31:44
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sun880806

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ssdghf at 2012-05-15 09:31:44:
现在有两个办法：
1、用凯氏定氮法的时候，你可以将滴定盐酸的浓度降低——0.01mol/L，这样1可能你就能测出来了，帮你算了一下，大概消耗盐酸的量是7-8mL。
2、用SDS-PAGE琼脂糖凝胶电泳的方法来测定，可以通过 ...

非常感谢，您说的这两点我以前没有考虑过，我会仔细考虑一下的。
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小硕
4楼2012-05-15 10:15:46
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sun880806

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-05-15 08:56:48:
写明为什么不行呀，溶剂影响还是肽本身性质？

你好，凯氏定氮、双缩脲是灵敏度的问题，我的样品浓度小，而且很少，所以不适合这两种方法；福林酚、考马斯发生的显色反应都是跟特定种类的氨基酸发生的反应，我的样品是功能性短肽，发生相应显色反应的氨基酸比例未知，结果偏差估计会很大
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小硕
5楼2012-05-15 10:21:17
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alqfren

木虫 (正式写手)

研究僧

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的不够清楚，你确定你的肽很纯吗？你知道他的分子量是多少是吧？
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研究僧
6楼2012-05-16 09:31:45
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sun880806

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by alqfren at 2012-05-16 09:31:45:
你说的不够清楚，你确定你的肽很纯吗？你知道他的分子量是多少是吧？

你好，我的样品还是比较纯的，分子量还不知道，没跑电泳呢，估计几KD吧
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小硕
7楼2012-05-17 00:51:26
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鱼丸粗面蔷蔷

新虫 (初入文坛)
楼主你好，请问你找到功能性短肽的浓度测定方法了吗？我也做功能性短肽，不知道要用什么方法好，我是先酶解之后测多肽浓度变化，其实是想要里面的短肽，求指教。
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8楼2013-07-10 20:20:22
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