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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于原生质体制备的问题
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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xuefangcg

铁虫 (正式写手)
哎~我也是这样，做了好长时间没有结果，我是做的杆菌的，酶解时间和甘氨酸浓度都不变，然后一次性做三个酶浓度，最后稀释涂布，我主要失败在于，24h培养后，不同酶浓度平板长出的菌落没有较大差异，而且不同稀释浓度长出的菌落也没有很大的差异，想知道除了稀释平板法还有什么别的方法可以衡量原生质体的制备率与再生率么？
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21楼2012-10-21 19:18:43
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amylee_810

新虫 (初入文坛)
亲，用崩溃酶。溶菌酶一般用来溶解细菌细胞壁，真菌一般用崩溃酶的。28℃恒温摇床酶解6小时。
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22楼2014-03-13 13:50:47
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partyboy

新虫 (初入文坛)
内容已删除
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23楼2014-08-19 10:26:52
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partyboy

新虫 (初入文坛)
1.2.2．酶液配制:称取所需要浓度的酶（Ｍ／Ｖ），分别以不同的渗透压缓冲液溶解，经0.22Lm微孔滤膜过滤除菌后使用。
1.2.3．原生质体制备及制备率的测定:挑取培养好的菌丝体置于无菌的小离心管中，3600r/min离心10min，弃上清液，用相应稳渗剂洗涤3次，无菌滤纸吸取多余水分，称量。每250mg湿菌丝加1ml酶液。在适宜的条件下振荡酶解一段时间，吸取一些酶解液稀释。用血球计数板计算原生质体个数（个／ｍｌ）。
稳渗剂可以用 甘露醇，山梨醇，
酶液可以用2%   或 1.5%
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24楼2014-08-19 10:29:27
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nakamori0319

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yc652090251 at 2012-05-14 21:39:00
可以试试差速离心...

请问差速离心转速要设置多少呢？
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25楼2014-10-21 15:20:50
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