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qizongxian

金虫 (小有名气)

[求助] 关于原生质体制备的问题

各位虫友,霉菌制备原生质体是加酶液,我配制了蜗牛酶的酶液,纤维素酶的酶液,还有溶壁酶,可是加进去之后效果不好只能够达到10^4的数量级,这个级数做原生质体融合不够啊~我想请问一下 我的问题出在哪里?
补充:酶液配制有一个星期了,保存是在四度冰箱里,酶解时间是四个小时,酶解温度是30℃~
还有,请问你们是怎么制备原生质体的?我怎么都做不出来~~听烦躁的!~
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amylee_810

新虫 (初入文坛)

亲,用崩溃酶。溶菌酶一般用来溶解细菌细胞壁,真菌一般用崩溃酶的。28℃恒温摇床酶解6小时。
22楼2014-03-13 13:50:47
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qizongxian: 金币+2, 有帮助, 感谢你回帖!~ 2012-05-12 00:16:38
zhang8826857: 金币+2, 欢迎常来微生物板块交流^_^ 2012-05-12 23:37:32
我前段时间也在做原生质体的制备,再生后跟你的差不多,后来我又看了几篇文献,发现每种菌的制备条件都不是一样的,这个条件得自己多多摸索,不知道你的条件是摸索过的还是怎么确定的,我打算过几天根据文献修改一下制备条件,比如培养基中甘氨酸的浓度,蔗糖含量,酶浓度及酶解时间等,最后挑选出再生后最好的条件。
   这是我的个人想法,我们可以互相交流一下!
低调做人好么~~
2楼2012-05-11 21:27:38
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qizongxian

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yc652090251 at 2012-05-11 21:27:38:
我前段时间也在做原生质体的制备,再生后跟你的差不多,后来我又看了几篇文献,发现每种菌的制备条件都不是一样的,这个条件得自己多多摸索,不知道你的条件是摸索过的还是怎么确定的,我打算过几天根据文献修改一 ...

不是,就是自己随即选定的,可是去年的时候能做出来。你说的那些我都知道,一般是做单因素优化,酶解时间,渗透压稳定剂,酶浓度还有就是菌龄等等条件,然后做一个正交什么的。能够问一下你制备的是神马原生质体吗?用到的是哪几种酶?
我知道不同公司的酶效果是不同的,不知道你用的是那个公司的酶啊?
3楼2012-05-12 00:16:04
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yc652090251

金虫 (小有名气)


rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-13 09:39:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by qizongxian at 2012-05-12 00:16:04:
不是,就是自己随即选定的,可是去年的时候能做出来。你说的那些我都知道,一般是做单因素优化,酶解时间,渗透压稳定剂,酶浓度还有就是菌龄等等条件,然后做一个正交什么的。能够问一下你制备的是神马原生质体 ...

我前段时间用的是国产的溶菌酶,具体哪个公司的我没问。条件也是根据文献选定的一些中等条件,做出来效果不好,而且我用这个酶提了一次基因组,一样效果不好!师兄他们说是酶的问题,后来实验室从国外进口过来一瓶新的 ,还没用呢,不知道效果怎么样,打算过几天再做一次,我做的是链霉菌。我觉得配好的酶溶液放冰箱应该没什么影响吧!
低调做人好么~~
4楼2012-05-12 12:34:07
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