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紫菱Kitty金虫 (小有名气)
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[求助]
【求助】小鼠囊胚的RNA-FISH
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我最近在做一个实验，研究小鼠囊胚的RNA表达情况，用的荧光探针。 首先考虑的使用全程悬浮法做RNA-FISH： 1.用酸去透明带 2.4%多聚甲醛固定10min 3.PBs洗三遍，每次5min 4.10mg/ml蛋白酶K处理5min 5.PBs洗三遍，每次5min 6.放入含50%甲酰胺的杂交液预杂交5min 7.放入含探针的杂交液37度过夜 8.PBs洗三遍，每次5min 9 DAPI染色 或者： 改用贴片的方法做，试图首先把胚胎固定在玻片上使外观形态不变化。 1.用酸去透明带 2 PBs洗三遍，每次5min 3 在6mg/mlBSA的PBS中洗一遍 4 直接滴在多聚赖氨酸包被的载玻片上，干燥30min 5 多聚甲醛固定10min 610mg/ml蛋白酶K处理5min 7.放入含50%甲酰胺的杂交液预杂交5min 7.放入含探针的杂交液37度过夜 9.PBs洗三遍，每次5min 10 DAPI染色 这是在网上看到一位仁兄发的protocol，但是这两个方法他都没用得到理想的结果，第一个的问题：得到的图片差，有信号但有很多杂点，另外囊胚转移至50%甲酰胺里因为渗透压的原因立即收缩变形了，得不到完美的球状囊胚图片。 第二个：发现掉片非常严重，即使存在的囊胚也无信号。掉片是因为前期固定在玻片上没有做好，但怎么可以固定好呢？ 在此求教小小木虫的大侠们！！！！跪求小鼠囊胚RNA-FISH的实验步骤！！！！ |
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紫菱Kitty
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2楼2012-05-27 13:31:10
