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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hebauzjy

金虫 (小有名气)

[求助] 柱子出问题,请问是什么问题,怎么解决,谢谢

之前有人在waters液相用了高浓度磷酸做流动相,之后我的柱子柱效不太好了,后来又有人用了高浓度盐,我的柱子的柱压很高,请问是什么问题,怎么解决,谢谢
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hhw_123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-10 18:00:51
不接色谱柱,查看是否仪器管路发生堵塞,解决方法0.05%硝酸冲洗;如不是,接上色谱柱,是色谱柱原因,用20%甲醇水或已经睡冲洗,或把色谱柱筛板拆下,用蒸馏水超声。如还不行,换柱子,呵呵
6楼2012-05-10 13:56:28
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-10 18:05:49
引用回帖:
6楼: Originally posted by hhw_123 at 2012-05-10 13:56:28:
不接色谱柱,查看是否仪器管路发生堵塞,解决方法0.05%硝酸冲洗;如不是,接上色谱柱,是色谱柱原因,用20%甲醇水或已经睡冲洗,或把色谱柱筛板拆下,用蒸馏水超声。如还不行,换柱子,呵呵

一般在用磷酸盐作为高效液相的流动相时,很容易出现在进样后样品与蛋白出现共沉淀的情况,特别是磷酸缓冲盐不要超过50mml/L,PH不要超过10 !一般的液相系统都有预柱,不会在柱子里边,若出现柱压升高,那就是溶解性的蛋白质吸附在柱子表面,一般很难冲洗干净,先用甲醇-水的流动相洗柱子,再用乙腈来冲洗!
7楼2012-05-10 15:46:01
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
karl2100: 金币+1, 谢谢! 2012-05-13 00:06:34
hebauzjy: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-14 13:24:42
引用回帖:
24楼: Originally posted by 九仙桃 at 2012-05-11 23:17:26:
预柱的压力检测了吗?正常吗?也有可能是预柱柱芯堵了,要是这样的话,换个柱芯就好了。

若不是预柱问题,就有点麻烦了了。其实进中药的提取液本来就会有很多大分子的化合物,就会吸附在柱子表面,第二在使用高浓度磷酸缓冲也做流动相的时候,柱床容易出现溶解的情况,特别是,若你的柱子是一般的,较便宜的柱子,而且老柱子用过一段时间的,柱子老化的情况就会加重。乙酸铵会破坏柱床,不宜长时间使用!
25楼2012-05-12 00:01:07
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普通回帖

anyluk

主管区长 (文坛精英)

国家高级公共营养师

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-10 21:46:21
需要把系统流路好好洗洗才行
精益求精
2楼2012-05-10 10:39:14
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lijin79833

木虫 (著名写手)

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豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-10 18:00:41
一般来说是柱子堵塞了,或是柱筛板脏了,如果柱子可以拆开,超声一下柱筛板,不好拆的话,倒过来冲冲,看是否有效果。
用心做好药
3楼2012-05-10 11:03:22
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wojiazhuzhu

银虫 (正式写手)

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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-10 21:46:31
应该是析出的盐被冲到柱子里了,导致柱子堵塞了
4楼2012-05-10 11:10:31
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Garpio

木虫 (正式写手)

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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-10 21:46:40
是不是盐洗出来了,用40℃,冲一个吧,管路也保温
能拆柱子最好
5楼2012-05-10 11:16:51
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hhw_123

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 谷牛牛 at 2012-05-10 15:46:01:
一般在用磷酸盐作为高效液相的流动相时,很容易出现在进样后样品与蛋白出现共沉淀的情况,特别是磷酸缓冲盐不要超过50mml/L,PH不要超过10 !一般的液相系统都有预柱,不会在柱子里边,若出现柱压升高,那就是溶解 ...

怎么会出现蛋白?不理解。溶剂与流动相如果不同,可能会出现盐析,使色谱柱堵塞。
8楼2012-05-10 16:28:17
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-10 21:46:54
引用回帖:
8楼: Originally posted by hhw_123 at 2012-05-10 16:28:17:
怎么会出现蛋白?不理解。溶剂与流动相如果不同,可能会出现盐析,使色谱柱堵塞。

因为一般的沉淀剂,出去90%左右的蛋白,还有10%还溶解在处理液中!
9楼2012-05-10 17:32:01
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xinyue2011

新虫 (小有名气)

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xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-10 21:47:00
柱子赌赛的话会出现这种情况 要洗柱子了 当然要首先弄明白是什么东西堵了 然后再采取措施
10楼2012-05-10 19:31:03
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