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Minnie-zhang

新虫 (初入文坛)

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[求助] 双酶切粘性末端连接不上

本人正在超表达载体构建，需要用Pst1和Sal1双酶切质粒2300载体和目的基因，产生相同的粘性末端后连接，但就是连接不上，就高手指教！

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1楼 2012-05-04 15:52:13

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Minnie-zhang

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引用回帖:

6楼: Originally posted by panda73 at 2012-05-04 21:32:09:
有几点建议：
1：你的载体上PstI和SalI位点之间会切下一个可见的片段吗？
2：如果不能，你需要首先进行两者的单酶切（产生线性化载体片段），然后与未酶切的载体（超螺旋DNA)进行比较，以确定每个酶都在你的质 ...

目的基因酶切后电泳是正常，有1200bp左右。我觉得主要是2300载体酶切效果不怎么好，浓度低。还有会不会是我的2300有问题，我直接拿它电泳，只有一条片段。