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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提基因组的时候做第一次PCR效果很好，但是直接以PCR产物做第二次PCR的模版后...
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我一般初次PCR产物电泳，浓度一般在100ng/ul，然后二次PCR，同样的体系，将原来加DNA模板，改为加1ul 初次PCR的产物，都P出来了
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偶时晴天偶时雨
11楼2012-05-04 16:01:39
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2012-05-04 16:01:39:
我一般初次PCR产物电泳，浓度一般在100ng/ul，然后二次PCR，同样的体系，将原来加DNA模板，改为加1ul 初次PCR的产物，都P出来了

P出来后引物二聚体多吗？

另外条带能比初次PCR更亮吗？
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12楼2012-05-04 20:41:18
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议将一次产物进行稀释……可以的话上传一张凝胶检测图
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13楼2012-05-05 18:19:32
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:47:36
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2012-05-04 16:01:39:
我一般初次PCR产物电泳，浓度一般在100ng/ul，然后二次PCR，同样的体系，将原来加DNA模板，改为加1ul 初次PCR的产物，都P出来了

P出来绝对比第一次量多了。二聚体也不严重。我在想，是不是因为我每次需要二次PCR时，第一次PCR的产物都几乎不可见？而你的是不是因为第一次PCR产物再为模板时，浓度过高，导致第二次P不出来。毕竟以PCR产物为模板，当中多少有抑制后续PCR反应的成分
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偶时晴天偶时雨
14楼2012-05-07 08:55:21
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 13:56:59
你这种现象我也遇到了。我同时还做了个对照一个是直接进行PCR，由于这个量不够条带较弱，所以我又接着取这个产物做模板使用上述引物又进行一轮PCR，结果扩增出来的条带亮度和之前差不多，而且二聚体增多。
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好好学习，天天向上
15楼2012-05-22 23:52:01
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