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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我一般初次PCR产物电泳,浓度一般在100ng/ul,然后二次PCR,同样的体系,将原来加DNA模板,改为加1ul 初次PCR的产物,都P出来了
偶时晴天偶时雨
11楼2012-05-04 16:01:39
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danyzj01

银虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2012-05-04 16:01:39:
我一般初次PCR产物电泳,浓度一般在100ng/ul,然后二次PCR,同样的体系,将原来加DNA模板,改为加1ul 初次PCR的产物,都P出来了

P出来后引物二聚体多吗?

另外条带能比初次PCR更亮吗?
12楼2012-05-04 20:41:18
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议将一次产物进行稀释……可以的话上传一张凝胶检测图
13楼2012-05-05 18:19:32
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:47:36
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2012-05-04 16:01:39:
我一般初次PCR产物电泳,浓度一般在100ng/ul,然后二次PCR,同样的体系,将原来加DNA模板,改为加1ul 初次PCR的产物,都P出来了

P出来绝对比第一次量多了。二聚体也不严重。我在想,是不是因为我每次需要二次PCR时,第一次PCR的产物都几乎不可见?而你的是不是因为第一次PCR产物再为模板时,浓度过高,导致第二次P不出来。毕竟以PCR产物为模板,当中多少有抑制后续PCR反应的成分
偶时晴天偶时雨
14楼2012-05-07 08:55:21
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-23 13:56:59
你这种现象我也遇到了。我同时还做了个对照一个是直接进行PCR,由于这个量不够条带较弱,所以我又接着取这个产物做模板使用上述引物又进行一轮PCR,结果扩增出来的条带亮度和之前差不多,而且二聚体增多。
好好学习,天天向上
15楼2012-05-22 23:52:01
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