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danyzj01

银虫 (正式写手)

[求助] 提基因组的时候做第一次PCR效果很好，但是直接以PCR产物做第二次PCR的模版后...

直接以PCR产物做第二次PCR的模版后，引物二聚体增加很多，也有目的条带出来，另外PCR体系的组分未变
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1楼 2012-05-02 22:10:50
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:47:36
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2012-05-04 16:01:39:
我一般初次PCR产物电泳，浓度一般在100ng/ul，然后二次PCR，同样的体系，将原来加DNA模板，改为加1ul 初次PCR的产物，都P出来了

P出来绝对比第一次量多了。二聚体也不严重。我在想，是不是因为我每次需要二次PCR时，第一次PCR的产物都几乎不可见？而你的是不是因为第一次PCR产物再为模板时，浓度过高，导致第二次P不出来。毕竟以PCR产物为模板，当中多少有抑制后续PCR反应的成分
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偶时晴天偶时雨
14楼2012-05-07 08:55:21
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你回收的PCR产物再做模板加的量是不是太多了？
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未来不是梦
2楼2012-05-02 22:23:10
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-05-02 22:23:10:
你回收的PCR产物再做模板加的量是不是太多了？

模版量多还是别的东西多？
是直接以PCR产物做模版，不是回收琼脂糖胶上的PCR产物
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3楼2012-05-02 22:36:05
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物一般都要稀释的，太浓了反而不容易做好。
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4楼2012-05-02 23:25:40
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