24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2778  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

danyzj01

银虫 (正式写手)

[求助] 提基因组的时候做第一次PCR效果很好,但是直接以PCR产物做第二次PCR的模版后...

直接以PCR产物做第二次PCR的模版后,引物二聚体增加很多,也有目的条带出来,另外PCR体系的组分未变
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-07 13:47:36
引用回帖:
11楼: Originally posted by xiaoyanzi517 at 2012-05-04 16:01:39:
我一般初次PCR产物电泳,浓度一般在100ng/ul,然后二次PCR,同样的体系,将原来加DNA模板,改为加1ul 初次PCR的产物,都P出来了

P出来绝对比第一次量多了。二聚体也不严重。我在想,是不是因为我每次需要二次PCR时,第一次PCR的产物都几乎不可见?而你的是不是因为第一次PCR产物再为模板时,浓度过高,导致第二次P不出来。毕竟以PCR产物为模板,当中多少有抑制后续PCR反应的成分
偶时晴天偶时雨
14楼2012-05-07 08:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你回收的PCR产物再做模板加的量是不是太多了?
未来不是梦
2楼2012-05-02 22:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

danyzj01

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-05-02 22:23:10:
你回收的PCR产物再做模板加的量是不是太多了?

模版量多还是别的东西多?
是直接以PCR产物做模版,不是回收琼脂糖胶上的PCR产物
3楼2012-05-02 22:36:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物一般都要稀释的,太浓了反而不容易做好。
4楼2012-05-02 23:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见