应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR问题求教
52/1返回列表
查看: 1781  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

elbo

金虫 (小有名气)

[求助] PCR问题求教

扩增细菌16S rDNA,通用引物，反应体系25ul, 用TAKARA的premix，1ul模板（含量大于40ng/ul，每孔所用模板DNA不同），1.5ul引物（10umol/L）。扩增条件，94预变性3min，94,52,72各1min，25循环，72延伸10min。1%凝胶检测如下图，最左侧为不加模板的阴性对照.最右边为Marker（第4个带为1500bp）.为什么只有个别扩增出来，而且怎么有这么多的引物二聚体？退后温度低？还是模板含量太少？？
请各位达人不吝赐教啊！！

1% agarose
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-05-02 19:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~不能热启动的仪器没见过呢--！nemo88虫友出道很早啊，哈哈~ 2012-05-04 18:45:11
本帖内容被屏蔽
11楼2012-05-04 07:53:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 辛苦辛苦 2012-05-03 13:40:31
从图上看你所有样品都有二聚体。可能原因之一就是引物二聚体，就是引物以自己为模板把自己扩增出来了。原因之二可能是体系被污染，原因之三可能是退火温度太低。我认为前两个原因的可能性较大，建议做个NTC，同时换个无酶水
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-02 20:20:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)
不好意思，刚看了一下，你已经做了NTC，所以最可能的原因是引物自身，引物以自己为模板把自己扩增出来了
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-02 20:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-02 20:20:26:
从图上看你所有样品都有二聚体。可能原因之一就是引物二聚体，就是引物以自己为模板把自己扩增出来了。原因之二可能是体系被污染，原因之三可能是退火温度太低。我认为前两个原因的可能性较大，建议做个NTC，同时 ...

那么出现 引物二聚体的原因？引物是新配置的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-03 05:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭