24小时热门版块排行榜    

查看: 2238  |  回复: 13

emma立夏

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 世外清风 at 2012-05-02 08:23:32:
先测序看看吧,这样无谓的重复,不仅是对金钱的浪费,也浪费了最宝贵的时间和意志!PCR的假阳性率很高,不要太相信PCR,关键还是酶切,你可以用T载体上的酶切位点切切看,看是不是连入东西了!祝好运!

谢谢你的意见,但是由于我用的是pMD-18Tsimple vector。没有多克隆位点的。所以我只能用我片段上的酶切位点了。
11楼2012-05-07 19:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by post_ngao at 2012-05-02 20:14:59:
这种情况必须果断测序,否则一直盲做更加费钱,还费时费力。时间才是最宝贵的,一切能够用钱解决的问题都不是问题。

对的,大家都是建议测序,我也打算马上测序了,谢谢你的回复。
12楼2012-05-07 19:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by huguangdong at 2012-05-03 09:50:41:
你这个问题和保护碱基没关系,连接到T载体酶切效果比加保护碱基要好很多。PCR用的是TAQ酶吧?如果是,就直接做TA克隆,用的是哪个公司的酶?酶切效率也是问题,再就是看看水浴锅温度,用温度计测一下。还有你说你 ...

都是用TAKARA的,pcr mix ,酶也都是用的takara~~~谢谢你的提议~!!
13楼2012-05-07 21:08:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

琼Echo

新虫 (初入文坛)

嘿,你好,现在我双酶切也遇到了跟你一样的问题,PCR检测到阳性提质粒后20微升体系酶切也切不开,送去测了一个反应,上游酶切位点没有问题,目的片段也连上了,但发现pMD19T测的那部分序列很乱(这不排除测序两端不准的可能性),但我想这应该不会造成酶切不开、、、、接下来可能需要先单酶切看看能切开否?   
看到你的帖子,所以就想问一下你的问题现在解决没有,切开了吗?
谢谢你!
恋着拟南芥的菇凉
14楼2013-10-30 17:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 emma立夏 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂; 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
请填处理意见