| 查看: 2275 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
双酶切连TA后切不开
|
||
|
各位大侠，这里看~~~ 一、我的目的片段已经与pMD-18Tsimple vector连接上之后，挑菌落pcr有目的条带呈阳性。 二、然后提质粒之后做双酶切。可是却切不开。用的是EcoR l 和Sal l两种酶，我做的是20ul体系，反应3h，37°c，水浴。 三、电泳结果，与未酶切的质粒条带做对比，条带跑到后面，EcoR l 单酶切了，但是Sal l与没有酶切组相同。 我考虑的问题： 因为我的pcr引物自加上了这两种酶切位点，但是当时没有考虑到保护碱基的特异性，都只是在酶切位点后加了一个A。是不是这个引物设计的时候出现问题了？ PS：酶活应该是没有问题的，因为用来切过实验室的其他载体，能切开的。 现在想要扩增这个片段，然后插入表达载体，但是一直切不开，很痛苦，做了一个多月了。大家请帮帮忙，八仙过海各显神通~~~本人不胜感激~！ |
回复此楼» 猜你喜欢
299求调剂
已经有8人回复
-
316求调剂
已经有8人回复
-
308求调剂
已经有4人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有15人回复
-
274求调剂
已经有12人回复
-
一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂
已经有7人回复
-
化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211
已经有3人回复
-
机械学硕总分317求调剂！！！！
已经有4人回复
-
290分调剂求助
已经有3人回复
-
275求调剂
已经有4人回复
14楼2013-10-30 17:31:10
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-05-01 12:10:40
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+3, 鼓励回答 2012-05-01 12:10:40
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2012-05-01 11:43:53
3楼2012-05-01 14:01:12
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2012-05-01 15:22:26
20