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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫亲和层析
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yuehuashou

新虫 (初入文坛)

[交流] 免疫亲和层析

用免疫亲和层析纯化植物中的外源蛋白，然后免小鼠制抗体，用之前实验得到的抗体做western blot，发现有杂带，说明当初纯化的外源蛋白纯度不够，所以我准备在洗脱前添加一个预洗脱过程，尽量除去杂蛋白，但是不知道用什么样的预洗脱缓冲液。样品用PBS溶的，结合后洗柱用的也是PBS，洗脱液是0.1M Gly-Hcl（pH 2.5）。另外，请问大家在做免疫亲和层析时是怎样筛选洗脱条件的？网上看到的都只给出了大的方向，因为抗体珍贵，所以希望大家能就自己的经验谈一些比较细的方法，还有就是在实验过程中应该注意的地方。谢谢！
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1楼 2012-04-27 22:27:47
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277961055

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
yuehuashou(金币+1): 谢谢参与
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-07-26 16:19:12
你用的抗体柱取纯化蛋白吗？假如是的话不应该有非特异性条带的，除非你的抗体本身特异性较差。
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3楼2012-07-26 13:18:43
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