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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yuehuashou

新虫 (初入文坛)


[交流] 免疫亲和层析

用免疫亲和层析纯化植物中的外源蛋白,然后免小鼠制抗体,用之前实验得到的抗体做western blot,发现有杂带,说明当初纯化的外源蛋白纯度不够,所以我准备在洗脱前添加一个预洗脱过程,尽量除去杂蛋白,但是不知道用什么样的预洗脱缓冲液。样品用PBS溶的,结合后洗柱用的也是PBS,洗脱液是0.1M Gly-Hcl(pH 2.5)。另外,请问大家在做免疫亲和层析时是怎样筛选洗脱条件的?网上看到的都只给出了大的方向,因为抗体珍贵,所以希望大家能就自己的经验谈一些比较细的方法,还有就是在实验过程中应该注意的地方。谢谢!
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铜虫 (初入文坛)


★ ★ ★
yuehuashou(金币+1): 谢谢参与
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖! 2012-07-26 16:19:12
你用的抗体柱取纯化蛋白吗?假如是的话不应该有非特异性条带的,除非你的抗体本身特异性较差。
3楼2012-07-26 13:18:43
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