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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？
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songzi136

金虫 (正式写手)

[交流] 普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？已有17人参与

普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？

        现有一个分子量7万左右的蛋白，我想知道普通的HPLC C18 色谱柱（5微米，非蛋白专用柱），因为没钱买蛋白专用柱。

        如果将含有此蛋白的溶液进入色谱柱。

结果会是怎样的：

1.蛋白会很快流出色谱柱？

2.还是会留在色谱柱前面？

3.一般的蛋白质在5%的甲醇中会不会变性？

4.堵柱子的可能性有多大？
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1楼2012-04-27 16:56:59
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mikeliubao

金虫 (小有名气)
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soundhorizo: 金币+3, 感谢参与~ 欢迎常来分析版~ ^^ 2012-04-28 19:40:15
首先做蛋白的C18与粒径大小关系不大，要选在孔径大的C18柱，越大分子量需要越大的孔径柱子。

其次，蛋白质样品一般不能溶解在甲醇中，要用乙腈溶解，一般蛋白质在乙腈的溶解度比甲醇高。包括流动相，也要用乙腈。一般还要加三氟乙酸形成离子对增加蛋白质在C18上的保留。所以，一般C18对蛋白的保留性能差，不会被吸附在C18颗粒上，除非堵在柱头或由于流动相性质改变而造成蛋白沉淀在C18颗粒之间。

还有，你用梯度程序初始状态下的流动相配比来溶解样品，溶解后用高速离心机离心（4000-5000g），之后抽取中间的溶液上你现有C18柱试试看能不能分离，如果可以，就不用买柱子了。
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7楼2012-04-28 10:25:02
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巫女子佩

金虫 (正式写手)
★
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普通柱子肯定会堵的，柱残留也可能很高，几下就不能用了，至于说分离好不好那就另说了。
其实国产有很好的聚合物填料的柱子，专门为蛋白质准备的，分离又快又好，价格比你毁一个C18可能还低，C18是通用型柱子，爱惜着点以后分很多小分子还可以用的，何苦因为一次试验就全毁了。跟你老板商量一下呗。
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16楼2013-10-10 15:58:52
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lanpishu23

木虫 (小有名气)
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408851978: 金币+1 2012-04-28 06:23:28
估计进去就把柱子给堵了，要买大粒径的柱子，做蛋白质要凝胶柱吧
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没有最好，只有更好
2楼2012-04-27 19:22:53
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lzhwin

木虫 (正式写手)
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408851978: 金币+1 2012-04-28 06:23:20
同楼上
C18柱子不能分析蛋白的，直接堵住
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3楼2012-04-28 01:37:52
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sp_312

铁杆木虫 (正式写手)
★
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凝胶色谱、反相色谱、亲和色谱、离子色谱都可以。C18当然也可以，不过你得选择孔径大些的比如300A。。。可以直接咨询色谱柱供应商
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4楼2012-04-28 09:34:20
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liuwei10987

木虫 (正式写手)
★
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蛋白质需要用凝胶柱分离。
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5楼2012-04-28 09:36:14
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swt1898

铁虫 (著名写手)
★
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蛋白质和多肽可以用Bio-C18色谱柱，专门做大分子的
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6楼2012-04-28 10:13:57
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pfizer2001

金虫 (著名写手)
★
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蛋白分析RP柱子当然可以，但是孔径一般都是300A的
你的这样的分子量的很少用RP 一般用凝胶柱子
省钱去分离蛋白似乎很难 柱子很贵的
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8楼2012-04-28 17:36:08
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)
★
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估计很难啊 要不借一只凝胶柱吧
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9楼2012-04-28 18:58:39
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padodo

至尊木虫 (职业作家)

胖嘟嘟

优秀版主
★
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蛋白质需要先变性（使用含TFA的流动相），然后使用大孔径的柱子
否则的话，堵你不商量
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我有什么能帮助您的吗？
10楼2012-04-28 20:19:47
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