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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？
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量筒

铁虫 (初入文坛)
★
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你这个真不可以！！还是不要怕麻烦。换柱子吧！
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路。。。。。在脚下！！！梦在远方！！！！
11楼2012-04-29 11:40:48
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mltr8539

木虫 (正式写手)
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一般液相孔径是130A，可以做分子量30000以下的分子；再大了就要用300A的了。
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12楼2012-04-30 08:57:03
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xiaojing2011

铜虫 (初入文坛)
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楼上说的“其次，蛋白质样品一般不能溶解在甲醇中，要用乙腈溶解，一般蛋白质在乙腈的溶解度比甲醇高。包括流动相，也要用乙腈。”蛋白质在乙腈和甲醇中不会变性沉淀吗？
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13楼2012-06-02 09:18:58
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mingge

银虫 (正式写手)
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蛋白分离可以通过试试反相，但是要看蛋白的具体性质，PI值等，只有分子量信息是没法判断的，这么大的分子量最好使用300A孔径的柱子，不然很容易无保留。
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Q1454596160
14楼2013-10-09 11:06:42
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hinge1001

银虫 (小有名气)
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反相是可以用来分析蛋白的，而且分辨率绝佳，但是要考虑到填料孔径的大小，官能基最好选择疏水作用弱的C4或C8
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15楼2013-10-10 15:09:39
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巫女子佩

金虫 (正式写手)
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普通柱子肯定会堵的，柱残留也可能很高，几下就不能用了，至于说分离好不好那就另说了。
其实国产有很好的聚合物填料的柱子，专门为蛋白质准备的，分离又快又好，价格比你毁一个C18可能还低，C18是通用型柱子，爱惜着点以后分很多小分子还可以用的，何苦因为一次试验就全毁了。跟你老板商量一下呗。
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16楼2013-10-10 15:58:52
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longer_

木虫 (小有名气)

女汉子
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引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaojing2011 at 2012-06-02 09:18:58
楼上说的“其次，蛋白质样品一般不能溶解在甲醇中，要用乙腈溶解，一般蛋白质在乙腈的溶解度比甲醇高。包括流动相，也要用乙腈。”蛋白质在乙腈和甲醇中不会变性沉淀吗？

我对这个问题也很疑惑，你现在知道答案了吗，知道了能告诉我吗
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山不在高，水不在深
17楼2014-09-06 12:20:30
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尼达叶胶囊

金虫 (初入文坛)
★
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会流出还是保留那还要看你的是什么蛋白还有你用的流动相，理论上时间足够长都是可以流出的。你用的C18得柱子，C18的极性很小，极性大的蛋白保留难一些出来的快，只能这么解释了。
在甲醇中变性是会的，快慢和多少的问题而已，同一浓度的甲醇中不同蛋白变性的快慢不同，浓度低的甲醇中变性比高浓度的慢。
关于堵柱子的问题，300埃的柱子是可以做很多蛋白质的。分子量100K以下的应该都没问题。如果你的柱子填料孔径不是300埃的就别做蛋白质了，肯定会堵。
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18楼2015-09-07 20:26:14
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