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量筒

铁虫 (初入文坛)


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你这个真不可以!!还是不要怕麻烦。换柱子吧!
路。。。。。在脚下!!!梦在远方!!!!
11楼2012-04-29 11:40:48
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mltr8539

木虫 (正式写手)


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一般液相孔径是130A,可以做分子量30000以下的分子;再大了就要用300A的了。
12楼2012-04-30 08:57:03
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xiaojing2011

铜虫 (初入文坛)


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楼上说的“其次,蛋白质样品一般不能溶解在甲醇中,要用乙腈溶解,一般蛋白质在乙腈的溶解度比甲醇高。包括流动相,也要用乙腈。”蛋白质在乙腈和甲醇中不会变性沉淀吗?
13楼2012-06-02 09:18:58
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mingge

银虫 (正式写手)


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蛋白分离可以通过试试反相,但是要看蛋白的具体性质,PI值等,只有分子量信息是没法判断的,这么大的分子量最好使用300A孔径的柱子,不然很容易无保留。
Q1454596160
14楼2013-10-09 11:06:42
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hinge1001

银虫 (小有名气)



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反相是可以用来分析蛋白的,而且分辨率绝佳,但是要考虑到填料孔径的大小,官能基最好选择疏水作用弱的C4或C8
15楼2013-10-10 15:09:39
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巫女子佩

金虫 (正式写手)


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普通柱子肯定会堵的,柱残留也可能很高,几下就不能用了,至于说分离好不好那就另说了。
其实国产有很好的聚合物填料的柱子,专门为蛋白质准备的,分离又快又好,价格比你毁一个C18可能还低,C18是通用型柱子,爱惜着点以后分很多小分子还可以用的,何苦因为一次试验就全毁了。跟你老板商量一下呗。
16楼2013-10-10 15:58:52
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longer_

木虫 (小有名气)

女汉子


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引用回帖:
13楼: Originally posted by xiaojing2011 at 2012-06-02 09:18:58
楼上说的“其次,蛋白质样品一般不能溶解在甲醇中,要用乙腈溶解,一般蛋白质在乙腈的溶解度比甲醇高。包括流动相,也要用乙腈。”蛋白质在乙腈和甲醇中不会变性沉淀吗?

我对这个问题也很疑惑,你现在知道答案了吗,知道了能告诉我吗
山不在高,水不在深
17楼2014-09-06 12:20:30
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尼达叶胶囊

金虫 (初入文坛)


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会流出还是保留那还要看你的是什么蛋白还有你用的流动相,理论上时间足够长都是可以流出的。你用的C18得柱子,C18的极性很小,极性大的蛋白保留难一些出来的快,只能这么解释了。
在甲醇中变性是会的,快慢和多少的问题而已,同一浓度的甲醇中不同蛋白变性的快慢不同,浓度低的甲醇中变性比高浓度的慢。
关于堵柱子的问题,300埃的柱子是可以做很多蛋白质的。分子量100K以下的应该都没问题。如果你的柱子填料孔径不是300埃的就别做蛋白质了,肯定会堵。
18楼2015-09-07 20:26:14
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