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songzi136

金虫 (正式写手)

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[交流] 普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？已有17人参与

普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？

现有一个分子量7万左右的蛋白，我想知道普通的HPLC C18 色谱柱（5微米，非蛋白专用柱），因为没钱买蛋白专用柱。

如果将含有此蛋白的溶液进入色谱柱。

结果会是怎样的：

1.蛋白会很快流出色谱柱？

2.还是会留在色谱柱前面？

3.一般的蛋白质在5%的甲醇中会不会变性？

4.堵柱子的可能性有多大？

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1楼 2012-04-27 16:56:59

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尼达叶胶囊

金虫 (初入文坛)

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★
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会流出还是保留那还要看你的是什么蛋白还有你用的流动相，理论上时间足够长都是可以流出的。你用的C18得柱子，C18的极性很小，极性大的蛋白保留难一些出来的快，只能这么解释了。
在甲醇中变性是会的，快慢和多少的问题而已，同一浓度的甲醇中不同蛋白变性的快慢不同，浓度低的甲醇中变性比高浓度的慢。
关于堵柱子的问题，300埃的柱子是可以做很多蛋白质的。分子量100K以下的应该都没问题。如果你的柱子填料孔径不是300埃的就别做蛋白质了，肯定会堵。