应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于5‘RACE
172/2返回列表上一页12
查看: 2445  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liumangtu403

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-04-26 21:53:59:
没有扩出想要的基因。挑了两条带测序，发现在别的基因中间有连续g的地方加上了接头。
不知道怎么判断是不是全长呢...不过如果要的是mRNA，但找不到起始密码子就肯定不是全长。

我觉得会不会是剪切变体呢？  
另外我要的片段是ncRNA, 没法子预测......
赞一下 回复此楼
11楼2012-04-27 13:49:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liumangtu403

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by vickie20 at 2012-04-27 09:27:21:
5'端的两个引物都是下游引物吧？在设计的时候上游引物以及产物大小这些参数是不是就不用管了？如何知道这两个下游引物跟接头引物的匹配分数呢？

5‘RACE 不是只要一个特异性引物吗？设计一个下游引物就可以了（可以多设计几个备用）；你如果要看接头引物跟你设计引物的匹配情况，个人认为只要用DNAMAN 、oligo之类的软件分析一下就行了。
赞一下 回复此楼
12楼2012-04-27 14:00:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liumangtu403: 金币+1, ★有帮助 2012-04-27 17:59:46
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-28 08:31:22
你可以将得到的序列 再重新设计全长引物重新扩一下 然后再重新分析ORF部分就知道是不是全长啦
赞一下 回复此楼
13楼2012-04-27 14:39:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liumangtu403

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 脱水拂空 at 2012-04-27 14:39:49:
你可以将得到的序列 再重新设计全长引物重新扩一下 然后再重新分析ORF部分就知道是不是全长啦

用全长引物扩不是只能证明片段有这么长，但不能证明片段不只是这么长....不知道我理解的有没有误

另外我的片段是non-coding RNA,原则上应该没有ORF或只有短的ORF......
赞一下 回复此楼
14楼2012-04-27 17:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liumangtu403: 金币+1, ★有帮助 2012-05-04 16:49:19
楼主用的什么酶？我实验室有同学曾经用比较差的taq酶做RACE结果就不太好，后来换了好一点的酶就发现差酶扩出的片段中间比好酶少了一大段。还有一种可能也是我见到过的，这个mRNA被选择性的剪切了，它可能有两种以上加工方式，产生不止一种成熟的mRNA。
赞一下 回复此楼
15楼2012-04-28 09:47:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liumangtu403

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 分子菜鸟 at 2012-04-28 09:47:04:
楼主用的什么酶？我实验室有同学曾经用比较差的taq酶做RACE结果就不太好，后来换了好一点的酶就发现差酶扩出的片段中间比好酶少了一大段。还有一种可能也是我见到过的，这个mRNA被选择性的剪切了，它可能有两种以 ...

我用的是TITANIUM™ Taq DNA  Polymerase, 是比较好的酶，应该没有没有问题吧.....现在觉得RACE就算辛苦做出来也不知道是不是真的。。。很无语。。。
赞一下 回复此楼
16楼2012-05-04 16:49:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莲之殇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我遇到和你一样的问题  目前在设计上游引物  继续向前端扩
赞一下 回复此楼
向来缘浅，奈何情深；已然情深，何惧缘浅
17楼2016-01-18 16:37:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liumangtu403 的主题更新
172/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 8/400 2026-08-25 05:12 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-24 21:59 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭