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liumangtu403

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于5‘RACE 已有1人参与

各位高手:
         本人最近用clontech 做5'RACE,经过克隆测序确定是我要的序列,并且系列两端找到了相应的引物序列,同时也找到了接头序列。但是这个片段比网上的公布的序列要短(该序列目前仅有RNA ID,没有基因名),我想请问,是否连上接头的就一定是全长?如何确定扩出片段是全长?  盼回复!谢谢!
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liumangtu403: 金币+1, 有帮助 2012-05-04 16:49:19
楼主用的什么酶?我实验室有同学曾经用比较差的taq酶做RACE结果就不太好,后来换了好一点的酶就发现差酶扩出的片段中间比好酶少了一大段。还有一种可能也是我见到过的,这个mRNA被选择性的剪切了,它可能有两种以上加工方式,产生不止一种成熟的mRNA。
15楼2012-04-28 09:47:04
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liumangtu403

铁虫 (小有名气)

自己顶一下,各位高手请不吝赐教!
2楼2012-04-25 22:13:29
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XOooZzz

银虫 (小有名气)


西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-26 22:03:26
用的是smart吧?个人感觉smart容易在连续几个G的位点加上接头.....反正我做是失败了
3楼2012-04-25 22:51:10
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liumangtu403

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-04-25 22:51:10:
用的是smart吧?个人感觉smart容易在连续几个G的位点加上接头.....反正我做是失败了

我的序列扩出的最5‘没有连续的几个G,但下游10bp处有几个连续的G,有影响吗?

另外问一下,怎么知道是失败了(就是你怎么知道扩出的不是全长)?
4楼2012-04-26 12:50:47
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