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表达载体构建碰到诡异问题，请各路大神不吝赐教，拜谢。
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事情是这样，我要构建一个表达载体，目的片段大约2000bp，后面要加GFP作为marker。筛出阳性克隆来之后，提质粒测序验证。这时诡异问题出现了，因为我这个基因比较大，需要用多个测序引物，比如A,B两个引物。A为正向，B为反向，两者有overlapping。从A的结果看，有一段是我的目的基因，而接下来的却是载体的序列（比如A的测序结果是500bp，前200bp是我的目的基因的序列，201-500却是载体的序列）。但是从B的结果看这500bp却都是我的目的基因的序列。不知道这是什么原因啊。 PS.测序结果都很好，没有杂峰和套峰。 如果问题解决，本人愿赠送100金币作为酬谢。谢谢各位了。 |
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