应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 表达载体构建碰到诡异问题，请各路大神不吝赐教，拜谢。
71/1返回列表
查看: 1675  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ytulz111

新虫 (小有名气)

[求助] 表达载体构建碰到诡异问题，请各路大神不吝赐教，拜谢。

事情是这样，我要构建一个表达载体，目的片段大约2000bp，后面要加GFP作为marker。筛出阳性克隆来之后，提质粒测序验证。这时诡异问题出现了，因为我这个基因比较大，需要用多个测序引物，比如A,B两个引物。A为正向，B为反向，两者有overlapping。从A的结果看，有一段是我的目的基因，而接下来的却是载体的序列（比如A的测序结果是500bp，前200bp是我的目的基因的序列，201-500却是载体的序列）。但是从B的结果看这500bp却都是我的目的基因的序列。不知道这是什么原因啊。

PS.测序结果都很好，没有杂峰和套峰。
如果问题解决，本人愿赠送100金币作为酬谢。谢谢各位了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-21 16:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-21 20:35:05
传一下断裂处的峰图看看。要不你再测一次，看看结果。让测序公司给测序结果的时候顺便拼接下，然后再自己仔细看看。
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-21 20:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)
你的a和b不是载体上的通用引物么？
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-21 21:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytulz111

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2012-04-21 20:00:46:
传一下断裂处的峰图看看。要不你再测一次，看看结果。让测序公司给测序结果的时候顺便拼接下，然后再自己仔细看看。

附近是断裂处的峰图。我们自己实验室测序的，不送公司。
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-22 12:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytulz111

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-04-21 21:56:13:
你的a和b不是载体上的通用引物么？

不是，是自己设计的特异引物。
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-22 12:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunwei57

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
基因在连接的过程中断裂了,大片段连接会遇到这种情况的,重新做吧
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-22 21:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AnaSequence

金虫 (小有名气)
我也碰到过目的片段中间部分有丢失.
赞一下 回复此楼
7楼2012-04-24 08:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ytulz111 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭