24小时热门版块排行榜    

查看: 1618  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ytulz111

新虫 (小有名气)

[求助] 表达载体构建碰到诡异问题,请各路大神不吝赐教,拜谢。

事情是这样,我要构建一个表达载体,目的片段大约2000bp,后面要加GFP作为marker。筛出阳性克隆来之后,提质粒测序验证。这时诡异问题出现了,因为我这个基因比较大,需要用多个测序引物,比如A,B两个引物。A为正向,B为反向,两者有overlapping。从A的结果看,有一段是我的目的基因,而接下来的却是载体的序列(比如A的测序结果是500bp,前200bp是我的目的基因的序列,201-500却是载体的序列)。但是从B的结果看这500bp却都是我的目的基因的序列。不知道这是什么原因啊。

PS.测序结果都很好,没有杂峰和套峰。
如果问题解决,本人愿赠送100金币作为酬谢。谢谢各位了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytulz111

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-04-21 21:56:13:
你的a和b不是载体上的通用引物么?

不是,是自己设计的特异引物。
5楼2012-04-22 12:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励帮助解答,欢迎继续交流。 2012-04-21 20:35:05
传一下断裂处的峰图看看。要不你再测一次,看看结果。让测序公司给测序结果的时候顺便拼接下,然后再自己仔细看看。
2楼2012-04-21 20:00:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)

你的a和b不是载体上的通用引物么?
3楼2012-04-21 21:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytulz111

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2012-04-21 20:00:46:
传一下断裂处的峰图看看。要不你再测一次,看看结果。让测序公司给测序结果的时候顺便拼接下,然后再自己仔细看看。

附近是断裂处的峰图。我们自己实验室测序的,不送公司。


4楼2012-04-22 12:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:40 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 4/200 2026-09-01 01:30 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 3/150 2026-08-31 22:12 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
请填处理意见