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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：FRET熔点实验方案（荧光共振能量转移测DNA的熔点）参数设置
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llxxjj

金虫 (正式写手)

[求助] 求助：FRET熔点实验方案（荧光共振能量转移测DNA的熔点）参数设置

各位虫友：
您好！我想做下面的实验，文献通常用的仪器是：Bio-Rad荧光定量PCR-iQ5，我们实验室有的仪器型号是ABI7500 PCR仪，请问用ABI7500 PCR仪能否进行实现下列实验？如何设置参数？
FRET熔点实验方案（荧光共振能量转移测DNA的熔点）：
使用的荧光标记DNA：F21T (5’-FAM-G3[T2AG3]3-TAMRA-3’,荧光供体是FAM: 6-carboxyfluorescein,，荧光受体TAMRA: 6-carboxytetramethylrhodamine)。F21T用缓冲液稀释到一定的浓度(400nM)，在95℃下加热5 min后缓慢冷却退火到室温作为储存液。测试样品由10ul 的F21T储存液和10ul化合物溶液(2倍测试浓度)混合后孵育1小时而形成。实验时先25℃平衡5min，再逐渐升温，读数间隔l℃，温度范围25 - 99℃，每个测试温度测试样品的恒温时间为lmin。
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1楼 2012-04-20 11:38:40
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