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llxxjj

金虫 (正式写手)

[求助] 求助:FRET熔点实验方案(荧光共振能量转移测DNA的熔点)参数设置

各位虫友:
您好!我想做下面的实验,文献通常用的仪器是:Bio-Rad荧光定量PCR-iQ5,我们实验室有的仪器型号是ABI7500 PCR仪,请问用ABI7500 PCR仪能否进行实现下列实验?如何设置参数?
FRET熔点实验方案(荧光共振能量转移测DNA的熔点):
使用的荧光标记DNA:F21T (5’-FAM-G3[T2AG3]3-TAMRA-3’,荧光供体是FAM: 6-carboxyfluorescein,,荧光受体TAMRA: 6-carboxytetramethylrhodamine)。F21T用缓冲液稀释到一定的浓度(400nM),在95℃下加热5 min后缓慢冷却退火到室温作为储存液。测试样品由10ul 的F21T储存液和10ul化合物溶液(2倍测试浓度)混合后孵育1小时而形成。实验时先25℃平衡5min,再逐渐升温,读数间隔l℃,温度范围25 - 99℃,每个测试温度测试样品的恒温时间为lmin。
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