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木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
chlamy: 金币+1, 有帮助 2012-04-20 17:22:49
酶切完以后  有很多成分的  最好回收一下 也相当于纯化了
快乐奋斗,创造所有。
11楼2012-04-20 11:22:15
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dinghonglan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
chlamy: 金币+1, 有帮助 2012-04-20 17:23:05
你可以试一下65度加热20min灭活体系中的酶,再用乙醇沉淀法回收酶切后的质粒,不用回收试剂盒
12楼2012-04-20 11:56:06
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


chlamy: 金币+1, 有帮助 2012-04-20 17:23:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-19 18:59:50:
就是说酶切好了,要回收后再连接,不能直接连吗?如果检测酶切完全,应该可以直接用吧?

也不可以,回收的目的不仅仅是回收,还有纯化,为下一步提供纯的样品并且在下个反应合适的buffer中进行。
生活是面镜子~
13楼2012-04-20 13:03:23
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
chlamy: 回帖置顶 2012-04-20 17:29:02
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good! 2012-04-24 18:40:58
引用回帖:
8楼: Originally posted by chlamy at 2012-04-19 20:35:14:
的却可能存在你说的这种情况,质粒没有完全切开,但是我的质粒全长13K,双酶切开后长12K,电泳回收时也很难跑开,回收就挺难了。
对于酶切体系,是这样的。我们取其中的少部分来做连接。通过电泳条带可以很明显 ...

载体确实不小,
1.通过电泳都可以看出一个酶切开了,就代表还是可以通过跑胶将全长及酶切后的产物分开的,况且超螺旋会小很多,做个长胶,多跑会。
2.通过生长出来的菌落判断连接效率没有道理。
3.双酶切可以分步进行,不一定要在同一种buffer中同时加两个酶,这样会提高效率。
4.防止载体自连可以去磷酸化。
生活是面镜子~
14楼2012-04-20 13:11:18
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kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by to-be at 2012-04-20 13:11:18:
载体确实不小,
1.通过电泳都可以看出一个酶切开了,就代表还是可以通过跑胶将全长及酶切后的产物分开的,况且超螺旋会小很多,做个长胶,多跑会。
2.通过生长出来的菌落判断连接效率没有道理。
3.双酶切可以 ...

那个3中的分步酶切是先切一次,然后回收,再换酶再切一次吗?
15楼2012-04-20 15:17:58
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
chlamy: 金币+1, 有帮助 2012-04-20 17:24:09
chlamy: 金币+1, 有帮助 2012-04-20 17:29:37
引用回帖:
15楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-20 15:17:58:
那个3中的分步酶切是先切一次,然后回收,再换酶再切一次吗?

可以不跑胶回收,吧DNA沉淀下来换buffer再切就可以了。
生活是面镜子~
16楼2012-04-20 15:59:44
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chlamy

木虫 (小有名气)

Thanks for everyone's kindly suggestion.
17楼2012-04-20 17:27:28
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chlamy

木虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by to-be at 2012-04-20 13:11:18:
载体确实不小,
1.通过电泳都可以看出一个酶切开了,就代表还是可以通过跑胶将全长及酶切后的产物分开的,况且超螺旋会小很多,做个长胶,多跑会。
2.通过生长出来的菌落判断连接效率没有道理。
3.双酶切可以 ...

防止载体自连可以去磷酸化是针对单酶切的质粒吗?
18楼2012-04-24 16:47:19
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to-be

金虫 (正式写手)

引用回帖:
18楼: Originally posted by chlamy at 2012-04-24 16:47:19:
防止载体自连可以去磷酸化是针对单酶切的质粒吗?

是的
生活是面镜子~
19楼2012-04-24 17:51:31
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