【答案】应助回帖

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11楼2012-04-20 11:22:15

dinghonglan

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【答案】应助回帖

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chlamy: 金币+1, ★有帮助 2012-04-20 17:23:05

你可以试一下65度加热20min灭活体系中的酶，再用乙醇沉淀法回收酶切后的质粒，不用回收试剂盒

12楼2012-04-20 11:56:06

to-be

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【答案】应助回帖

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chlamy: 金币+1, ★有帮助 2012-04-20 17:23:26

引用回帖:

4楼: Originally posted by kabuqinuo89 at 2012-04-19 18:59:50:
就是说酶切好了，要回收后再连接，不能直接连吗？如果检测酶切完全，应该可以直接用吧？

也不可以，回收的目的不仅仅是回收，还有纯化，为下一步提供纯的样品并且在下个反应合适的buffer中进行。

生活是面镜子~

13楼2012-04-20 13:03:23

to-be

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【答案】应助回帖

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chlamy: 回帖置顶 2012-04-20 17:29:02
西瓜: 金币+4, MolEPI+1, Good！ 2012-04-24 18:40:58

引用回帖:

8楼: Originally posted by chlamy at 2012-04-19 20:35:14:
的却可能存在你说的这种情况，质粒没有完全切开，但是我的质粒全长13K，双酶切开后长12K，电泳回收时也很难跑开，回收就挺难了。
对于酶切体系，是这样的。我们取其中的少部分来做连接。通过电泳条带可以很明显 ...

载体确实不小，
1.通过电泳都可以看出一个酶切开了，就代表还是可以通过跑胶将全长及酶切后的产物分开的，况且超螺旋会小很多，做个长胶，多跑会。
2.通过生长出来的菌落判断连接效率没有道理。
3.双酶切可以分步进行，不一定要在同一种buffer中同时加两个酶，这样会提高效率。
4.防止载体自连可以去磷酸化。

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生活是面镜子~

14楼2012-04-20 13:11:18

kabuqinuo89

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引用回帖:

14楼: Originally posted by to-be at 2012-04-20 13:11:18:
载体确实不小，
1.通过电泳都可以看出一个酶切开了，就代表还是可以通过跑胶将全长及酶切后的产物分开的，况且超螺旋会小很多，做个长胶，多跑会。
2.通过生长出来的菌落判断连接效率没有道理。
3.双酶切可以 ...

那个3中的分步酶切是先切一次，然后回收，再换酶再切一次吗？

15楼2012-04-20 15:17:58